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冬雪雪呀

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神 已有2人参与

最近做一个试验，用pcr 扩增基因组基因，跑胶，胶回收获得所需的基因片段，大约长1600，然后用胶回收得到的目的基因去扩增，在跑胶，但是这次在跑电泳之后，在凝胶成像上没发现目的基因，变成了长1000及以下的基因片段。求助，是用1600的基因片段跑胶，为什么最后成像出来的基因为1000以下的。条件之类的都一样，唯一不同的是loadingbuffer之前用6×，再跑目的基因片段时用的10×，难道和loading有关？但是去问了师兄师姐，说是和loading关系不大，也觉得，目的基因跑没了和loading有什么关系。。。

@biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-02-25 09:01:48
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-25 10:13:47
和loading beffer没关系，你可以把基因组上的片段连在载体上测个序，看对不对~还有就是如果以基因组上pcr下来的片段作为模板，最好一开始片段连段设计长一点，以免出现讲解，导致p不出来
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冬雪雪呀
···
2楼2017-02-25 09:16:39
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
同意楼上说的，从基因组扩出来后先测序，再进行下一步扩增。大小一样不代表就是那个基因

发自小木虫IOS客户端
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3楼2017-02-25 12:24:33
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莫等闲111

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
出现非特异性条带：①必要时，重新设计引物。②减低酶的量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。④适当提高退火温度；
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冬雪雪呀
站内信：http:///muchong.com/bbs/box.php评分及查找应助者发送的密码http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7465070&fpage=1
4楼2017-02-25 18:11:16
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冬雪雪呀

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2017-02-25 09:16:39
和loading beffer没关系，你可以把基因组上的片段连在载体上测个序，看对不对~还有就是如果以基因组上pcr下来的片段作为模板，最好一开始片段连段设计长一点，以免出现讲解，导致p不出来

好的谢谢

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5楼2017-02-27 10:57:28
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冬雪雪呀

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 莫等闲111 at 2017-02-25 18:11:16
出现非特异性条带：①必要时，重新设计引物。②减低酶的量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。④适当提高退火温度；

谢谢尝试一下

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6楼2017-02-27 10:57:47
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冬雪雪呀

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mochenmi at 2017-02-25 12:24:33
同意楼上说的，从基因组扩出来后先测序，再进行下一步扩增。大小一样不代表就是那个基因

嗯嗯

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7楼2017-02-27 10:57:55
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