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冬雪雪呀

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神 已有2人参与

最近做一个试验,用pcr 扩增基因组基因,跑胶,胶回收获得所需的基因片段,大约长1600,然后用胶回收得到的目的基因去扩增,在跑胶,但是这次在跑电泳之后,在凝胶成像上没发现目的基因,变成了长1000及以下的基因片段。求助,是用1600的基因片段跑胶,为什么最后成像出来的基因为1000以下的。条件之类的都一样,唯一不同的是loadingbuffer之前用6×,再跑目的基因片段时用的10×,难道和loading有关?但是去问了师兄师姐,说是和loading关系不大,也觉得,目的基因跑没了和loading有什么关系。。。

@biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-25 10:13:47
和loading beffer没关系,你可以把基因组上的片段连在载体上测个序,看对不对~还有就是如果以基因组上pcr下来的片段作为模板,最好一开始片段连段设计长一点,以免出现讲解,导致p不出来

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···
2楼2017-02-25 09:16:39
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mochenmi

铜虫 (小有名气)

同意楼上说的,从基因组扩出来后先测序,再进行下一步扩增。大小一样不代表就是那个基因

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3楼2017-02-25 12:24:33
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莫等闲111

版主 (知名作家)

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
出现非特异性条带:①必要时,重新设计引物。②减低酶的量或调换另一来源的酶。③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次数。④适当提高退火温度;

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站内信:http:///muchong.com/bbs/box.php评分及查找应助者发送的密码http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7465070&fpage=1
4楼2017-02-25 18:11:16
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冬雪雪呀

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2017-02-25 09:16:39
和loading beffer没关系,你可以把基因组上的片段连在载体上测个序,看对不对~还有就是如果以基因组上pcr下来的片段作为模板,最好一开始片段连段设计长一点,以免出现讲解,导致p不出来

好的谢谢

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5楼2017-02-27 10:57:28
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冬雪雪呀

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:
4楼: Originally posted by 莫等闲111 at 2017-02-25 18:11:16
出现非特异性条带:①必要时,重新设计引物。②减低酶的量或调换另一来源的酶。③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次数。④适当提高退火温度;

谢谢尝试一下

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6楼2017-02-27 10:57:47
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冬雪雪呀

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mochenmi at 2017-02-25 12:24:33
同意楼上说的,从基因组扩出来后先测序,再进行下一步扩增。大小一样不代表就是那个基因

嗯嗯

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7楼2017-02-27 10:57:55
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