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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 外源质粒DNA转化大肠杆菌
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Nigori

铜虫 (小有名气)

[交流] 外源质粒DNA转化大肠杆菌 已有3人参与

摘要：转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一。

1 .实验简介       
       转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一。现演示利用化学的方法(热击法)：使用化学试剂(如CaCl2)制备的感受态细胞,通过热击处理将载体DNA分子导入大肠杆菌细胞中。       
       实验中使用的主要仪器：电热恒温水槽         超净工作台        台式离心机          电热恒温震荡器       电热恒温              培养箱
       
2. 热击       
       DNA连接产物与大肠杆菌感受态细胞冰浴30min后,放置42摄氏度水浴锅中,热击90秒,后迅速将大肠杆菌转移到冰水中放置2-3min。       

3 .大肠杆菌复苏       
       上步热击后,一般都要对菌体进行一次复苏过程,向热击加入600-800 ul37摄氏度预热的无抗生素LB培养基后,置于摇床上37氏度,150rpm复苏培养45～60min。
               
4 .涂板培养       
       复苏后,收集的菌体去除部分上清液,预留100ul左右的菌液悬浮,用移液枪将重悬的菌加到抗性固体LB培养基中,用涂棒将菌涂布均匀,37摄氏度倒置培养12小时。
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1楼 2017-02-23 16:55:29
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药娘子

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
若是平板不长菌（空白对照也不长菌）原因会是什么呢

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2楼2017-03-05 08:26:24
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Zhibao1994

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
问下，热击52秒，和热击90秒有啥区别？这步的原理又是啥？我老师一直叫我热击42秒

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3楼2017-05-08 23:56:04
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王恋

新虫 (初入文坛)
真棒

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4楼2018-01-11 10:00:15
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王恋

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 药娘子 at 2017-03-05 08:26:24
若是平板不长菌（空白对照也不长菌）原因会是什么呢

我也想知道

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5楼2018-01-11 10:12:35
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药娘子

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by Zhibao1994 at 2017-05-08 23:56:04
问下，热击52秒，和热击90秒有啥区别？这步的原理又是啥？我老师一直叫我热击42秒

不同产家不同感受态细胞的热激时间是不一样的，参考书会有，通过热激使细胞膜打开重组载体得以进去

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6楼2018-01-11 11:01:54
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