应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 外源质粒DNA转化大肠杆菌
61/1返回列表
查看: 2048  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Nigori

铜虫 (小有名气)

[交流] 外源质粒DNA转化大肠杆菌 已有3人参与

摘要：转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一。

1 .实验简介       
       转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一。现演示利用化学的方法(热击法)：使用化学试剂(如CaCl2)制备的感受态细胞,通过热击处理将载体DNA分子导入大肠杆菌细胞中。       
       实验中使用的主要仪器：电热恒温水槽         超净工作台        台式离心机          电热恒温震荡器       电热恒温              培养箱
       
2. 热击       
       DNA连接产物与大肠杆菌感受态细胞冰浴30min后,放置42摄氏度水浴锅中,热击90秒,后迅速将大肠杆菌转移到冰水中放置2-3min。       

3 .大肠杆菌复苏       
       上步热击后,一般都要对菌体进行一次复苏过程,向热击加入600-800 ul37摄氏度预热的无抗生素LB培养基后,置于摇床上37氏度,150rpm复苏培养45～60min。
               
4 .涂板培养       
       复苏后,收集的菌体去除部分上清液,预留100ul左右的菌液悬浮,用移液枪将重悬的菌加到抗性固体LB培养基中,用涂棒将菌涂布均匀,37摄氏度倒置培养12小时。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2017-02-23 16:55:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

药娘子

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
若是平板不长菌（空白对照也不长菌）原因会是什么呢

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-03-05 08:26:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Zhibao1994

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
问下，热击52秒，和热击90秒有啥区别？这步的原理又是啥？我老师一直叫我热击42秒

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-05-08 23:56:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王恋

新虫 (初入文坛)
真棒

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
4楼2018-01-11 10:00:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王恋

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 药娘子 at 2017-03-05 08:26:24
若是平板不长菌（空白对照也不长菌）原因会是什么呢

我也想知道

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
5楼2018-01-11 10:12:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

药娘子

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by Zhibao1994 at 2017-05-08 23:56:04
问下，热击52秒，和热击90秒有啥区别？这步的原理又是啥？我老师一直叫我热击42秒

不同产家不同感受态细胞的热激时间是不一样的，参考书会有，通过热激使细胞膜打开重组载体得以进去

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2018-01-11 11:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Nigori 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭