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外源质粒DNA转化大肠杆菌 已有3人参与
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摘要：转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一。 1 .实验简介 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一。现演示利用化学的方法(热击法)：使用化学试剂(如CaCl2)制备的感受态细胞,通过热击处理将载体DNA分子导入大肠杆菌细胞中。 实验中使用的主要仪器：电热恒温水槽 超净工作台 台式离心机 电热恒温震荡器 电热恒温 培养箱 2. 热击 DNA连接产物与大肠杆菌感受态细胞冰浴30min后,放置42摄氏度水浴锅中,热击90秒,后迅速将大肠杆菌转移到冰水中放置2-3min。 3 .大肠杆菌复苏 上步热击后,一般都要对菌体进行一次复苏过程,向热击加入600-800 ul37摄氏度预热的无抗生素LB培养基后,置于摇床上37氏度,150rpm复苏培养45～60min。 4 .涂板培养 复苏后,收集的菌体去除部分上清液,预留100ul左右的菌液悬浮,用移液枪将重悬的菌加到抗性固体LB培养基中,用涂棒将菌涂布均匀,37摄氏度倒置培养12小时。 |
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Zhibao1994
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