| 查看: 1495 | 回复: 6 | ||||
| 当前主题已经存档。 | ||||
[交流]
求助MTT法检测加药后抑制肿瘤细胞的结果分析(附图)
|
||||
|
实验步骤: 1.按冻存细胞的方法消化细胞，每孔接种100μl细胞悬液（周四）。 2.培养一天待细胞贴壁后，换液，加入ADR(阿霉素)，进行实验处理（周五下午1:00）。 3.继续培养1~2天后去培养液，加入当天配制的MTT溶液每孔100μl，37℃恒温箱中4小时。 4.吸去MTT溶液，加入DMSO每孔100μl，混匀。 5.在酶标仪上测定吸光度，测定波长595nm. 在96孔板上加一个对照组(不加药),4个浓度组,每个处理平行的做6组,一共30个孔. 得到的曲线是不是不太对阿? 或者再怎么处理数据? |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 细胞培养 |
» 猜你喜欢
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有59人回复
-
filecode=后面第一个是大写字母
已经有5人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有21人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有10人回复
-
filecode
已经有12人回复
-
小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊
已经有13人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有7人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有13人回复
-
各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。
已经有8人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有22人回复
2楼2008-12-19 21:45:44
zhaocy8903
木虫 (知名作家)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3822.5
- 散金: 1238
- 红花: 17
- 帖子: 5798
- 在线: 1468.5小时
- 虫号: 636507
- 注册: 2008-10-25
- 专业: 微生物遗传育种学
3楼2008-12-20 10:01:57
cauzhangtao
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4297.5
- 散金: 13
- 红花: 3
- 帖子: 699
- 在线: 130小时
- 虫号: 547332
- 注册: 2008-04-17
- 性别: GG
- 专业: 分子与进化生态学
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
|
对你这个结果我分析了一下。首先你的细胞数目不知道，只知道100μL，还有就是OD值偏小，以我的经验OD值在0.5-1.2之间比较好，其次就是检测的波长，490nm。我不知道你为什么是595nm，详细步骤： 1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。 2.、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况 3.、5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。 4、每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。 5、终止培养，小心吸去孔内培养液。 6、每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。 7、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜） |
4楼2008-12-20 10:27:24
zhaocy8903
木虫 (知名作家)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3822.5
- 散金: 1238
- 红花: 17
- 帖子: 5798
- 在线: 1468.5小时
- 虫号: 636507
- 注册: 2008-10-25
- 专业: 微生物遗传育种学
5楼2008-12-20 16:20:12
6楼2008-12-22 18:15:18
7楼2009-04-10 22:22:29
