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求助MTT法检测加药后抑制肿瘤细胞的结果分析(附图)
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实验步骤: 1.按冻存细胞的方法消化细胞，每孔接种100μl细胞悬液（周四）。 2.培养一天待细胞贴壁后，换液，加入ADR(阿霉素)，进行实验处理（周五下午1:00）。 3.继续培养1~2天后去培养液，加入当天配制的MTT溶液每孔100μl，37℃恒温箱中4小时。 4.吸去MTT溶液，加入DMSO每孔100μl，混匀。 5.在酶标仪上测定吸光度，测定波长595nm. 在96孔板上加一个对照组(不加药),4个浓度组,每个处理平行的做6组,一共30个孔. 得到的曲线是不是不太对阿? 或者再怎么处理数据? |
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 细胞培养 |
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lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
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对你这个结果我分析了一下。首先你的细胞数目不知道，只知道100μL，还有就是OD值偏小，以我的经验OD值在0.5-1.2之间比较好，其次就是检测的波长，490nm。我不知道你为什么是595nm，详细步骤： 1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。 2.、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况 3.、5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。 4、每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。 5、终止培养，小心吸去孔内培养液。 6、每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。 7、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜） |
4楼2008-12-20 10:27:24
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