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dailiang

木虫 (正式写手)

[交流] 关于凝胶阻滞(EMSA)中核蛋白与DNA探针结合条件优化的问题

小弟最近受困于凝胶阻滞试验(EMSA),望各位大侠帮忙解决!
我是用核蛋白粗提液(全细胞裂解液)与启动子区域做结合,来研究启动子的,但是在试验中发现两者结合不理想,请问应该如何进行条件优化,才能得到较好结果?
下面是我的试验条件:
结合条件:
核蛋白粗提液(粗蛋白)量1-5ug,核酸量100ng,未加Poly(dI:dC),结合温度28,时间30分钟
电泳条件为:
5%PAGE,恒压120V,2小时
恳请各位大侠相助!

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:13 ]
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tiantangyu

核蛋白的纯度

我想问下楼主,你怎么知道加入核蛋白的量的?你加入粗制核蛋白电泳后效果怎么样?是否每个泳道都出现黑色拖带?
6楼2009-04-27 14:54:29
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dailiang

木虫 (正式写手)

这么久了都没有回应啊??
高手快来帮忙啊!!
2楼2009-01-14 14:55:45
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



lwf991229(金币+1,VIP+0):3Q~感谢参与讨论~欢迎常来~ 2-5 09:59
5%的非变性胶太软,能拿的起来吗,用这么低的浓度。

结合温度28度,是否合适。多是37 度。

我也不是很懂,共同探讨。
3楼2009-01-14 16:45:23
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dailiang

木虫 (正式写手)

谢谢楼上!
胶浓度5%,是因为我用的DNA片段在300-500bp,
结合温度是出于什么角度进行选择的呢?它的选择范围在多大?
请大侠指教
4楼2009-02-05 09:55:15
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