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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于凝胶阻滞（EMSA）中核蛋白与DNA探针结合条件优化的问题
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dailiang

木虫 (正式写手)

[交流] 关于凝胶阻滞（EMSA）中核蛋白与DNA探针结合条件优化的问题

小弟最近受困于凝胶阻滞试验（EMSA），望各位大侠帮忙解决！
我是用核蛋白粗提液（全细胞裂解液）与启动子区域做结合，来研究启动子的，但是在试验中发现两者结合不理想，请问应该如何进行条件优化，才能得到较好结果？
下面是我的试验条件：
结合条件：
核蛋白粗提液（粗蛋白）量1-5ug，核酸量100ng，未加Poly(dI:dC)，结合温度28，时间30分钟
电泳条件为：
5%PAGE，恒压120V，2小时
恳请各位大侠相助！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:13 ]
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1楼 2008-12-19 10:02:20
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dailiang

木虫 (正式写手)
这么久了都没有回应啊？？
高手快来帮忙啊！！
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2楼2009-01-14 14:55:45
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):3Q~感谢参与讨论~欢迎常来~ 2-5 09:59
5%的非变性胶太软，能拿的起来吗，用这么低的浓度。

结合温度28度，是否合适。多是37 度。

我也不是很懂，共同探讨。
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3楼2009-01-14 16:45:23
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dailiang

木虫 (正式写手)
谢谢楼上！
胶浓度5%，是因为我用的DNA片段在300-500bp，
结合温度是出于什么角度进行选择的呢？它的选择范围在多大？
请大侠指教
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4楼2009-02-05 09:55:15
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
你可以纯化蛋白 用纯化的蛋白应该验证结合更好
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5楼2009-02-05 10:34:20
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tiantangyu

核蛋白的纯度

我想问下楼主，你怎么知道加入核蛋白的量的？你加入粗制核蛋白电泳后效果怎么样？是否每个泳道都出现黑色拖带？
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6楼2009-04-27 14:54:29
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