24小时热门版块排行榜    

查看: 1159  |  回复: 5
当前主题已经存档。

dailiang

木虫 (正式写手)

[交流] 关于凝胶阻滞(EMSA)中核蛋白与DNA探针结合条件优化的问题

小弟最近受困于凝胶阻滞试验(EMSA),望各位大侠帮忙解决!
我是用核蛋白粗提液(全细胞裂解液)与启动子区域做结合,来研究启动子的,但是在试验中发现两者结合不理想,请问应该如何进行条件优化,才能得到较好结果?
下面是我的试验条件:
结合条件:
核蛋白粗提液(粗蛋白)量1-5ug,核酸量100ng,未加Poly(dI:dC),结合温度28,时间30分钟
电泳条件为:
5%PAGE,恒压120V,2小时
恳请各位大侠相助!

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:13 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailiang

木虫 (正式写手)

这么久了都没有回应啊??
高手快来帮忙啊!!
2楼2009-01-14 14:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



lwf991229(金币+1,VIP+0):3Q~感谢参与讨论~欢迎常来~ 2-5 09:59
5%的非变性胶太软,能拿的起来吗,用这么低的浓度。

结合温度28度,是否合适。多是37 度。

我也不是很懂,共同探讨。
3楼2009-01-14 16:45:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dailiang

木虫 (正式写手)

谢谢楼上!
胶浓度5%,是因为我用的DNA片段在300-500bp,
结合温度是出于什么角度进行选择的呢?它的选择范围在多大?
请大侠指教
4楼2009-02-05 09:55:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

你可以纯化蛋白 用纯化的蛋白应该验证结合更好
5楼2009-02-05 10:34:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tiantangyu

核蛋白的纯度

我想问下楼主,你怎么知道加入核蛋白的量的?你加入粗制核蛋白电泳后效果怎么样?是否每个泳道都出现黑色拖带?
6楼2009-04-27 14:54:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dailiang 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料与化工,270求调剂 +6 YXCT 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:21 by 向上的胖东
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[基金申请] 成果系统访问量大,请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦,已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 12/600 2026-03-01 22:10 by 海嵙Y
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见