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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » x-Gal筛选双歧杆菌不显色求解
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bunntly

木虫 (正式写手)

[求助] x-Gal筛选双歧杆菌不显色求解 已有3人参与

最近做双歧杆菌筛选，样本为婴儿粪便，打算用x-Gal作为筛选剂，但是前期预实验发现x-Gal均不显色
操作为：样本稀释而后涂布于添加了终浓度60mg/L X-Gal的MRS平板，厌氧37度培养48h,但是没有发现
蓝色菌落，试了a 和β型的x-Gal均不行，用的DMF溶解的，现配现用的。
有没有有经验的人帮指明下是哪里操作的问题，还是什么，为什么x-Gal不显色。
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1楼 2017-02-17 10:11:28
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amidural

木虫 (正式写手)
用的什么载体？

发自小木虫IOS客户端
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2楼2017-02-17 20:10:56
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bunntly

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by amidural at 2017-02-17 20:10:56
用的什么载体？

不是做的分子生物学 没有任何载体 双岐筛选用x-Gal筛选的原理是由于双歧杆菌具有半乳糖苷酶因而能分解X-Gal形成蓝色产物
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3楼2017-02-23 13:36:39
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yuyuwuxin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

小冀-: 应助指数+1 2017-02-24 21:26:06
1.首先要验证培养基，MRS上那些显色的大肠杆菌是否显色
2.你要确定你的双歧杆菌是有β半乳糖苷酶的。
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4楼2017-02-23 14:22:07
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bunntly

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuyuwuxin at 2017-02-23 14:22:07
1.首先要验证培养基，MRS上那些显色的大肠杆菌是否显色
2.你要确定你的双歧杆菌是有β半乳糖苷酶的。

培养基验证过MRS上大肠杆菌是能显色的，文献报道含有半乳糖苷酶。
我做的也不是不能显色而是和文献有所出入，文献是48h后拿出来就有蓝色
但是我的这个是48h培养后，在放到有氧环境4-8h后也有变蓝的菌落产生
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5楼2017-02-23 15:27:07
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yuyuwuxin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by bunntly at 2017-02-23 15:27:07
培养基验证过MRS上大肠杆菌是能显色的，文献报道含有半乳糖苷酶。
我做的也不是不能显色而是和文献有所出入，文献是48h后拿出来就有蓝色
但是我的这个是48h培养后，在放到有氧环境4-8h后也有变蓝的菌落产生...

那就是该方法不适合在厌氧环境中筛选双歧杆菌，双歧杆菌对四环素自然耐药，你可以用四环素筛选啊
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6楼2017-02-27 08:12:49
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

加IPTG或乳糖诱导
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7楼2017-02-27 19:23:10
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学霸我爱你

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主问题解决了吗？我现在遇到了和楼主一样的问题。。。
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8楼2017-03-22 20:24:18
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bunntly

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 学霸我爱你 at 2017-03-22 20:24:18
楼主问题解决了吗？我现在遇到了和楼主一样的问题。。。

解决了  我们用厌氧盒培养的 发现在培养过程中打开厌氧盒让氧气进入，然后再密封上 培养48h后就出现蓝色菌落了，不知你是否解决了
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9楼2017-06-02 16:56:52
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