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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 关于pull down实验，求大神进来指导一下
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意萧02

木虫 (正式写手)

[求助] 关于pull down实验，求大神进来指导一下 已有2人参与

最近做Pull down 实验验证酵母双杂交筛选的结果，在酵母双杂交实验中，筛选到3个可能的互作蛋白，所以再做了pull down再进行体外验证，pull down 构建目的蛋白表达时，试了很多的载体，后面只有pMAL-c2x这个载体在上清中表达我的目的蛋白，其他GST，HIS标签的pGEX6P-1等载体目的蛋白均在沉淀。现在想进行下一步实验验证酵母双杂结果与目的蛋白在体外是否互作，请教各位我下一步是不是要构建酵母双杂交筛选蛋白的其他标签的蛋白载体？（是否只要能让改蛋白表达就可以的标签载体？）然后过柱纯化，挂柱，WB验证？请做过的各位老师，同学指导一下，谢谢
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1楼 2017-02-16 10:12:22
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
原核表达？难道不是应该在细胞里表达吗？
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3楼2017-02-16 17:24:56
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11103324

银虫 (小有名气)
你的蛋白可溶表达就行，做好对照，去除标签的影响

发自小木虫IOS客户端
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打开心结
2楼2017-02-16 10:19:51
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ss小木瓜

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
意萧02: 金币+10, ★★★很有帮助, 5 2017-06-05 10:07:38
我是构了一个His，一个GST，其实不用很纯的蛋白，做好空白对照。
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4楼2017-04-19 17:24:03
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意萧02

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ss小木瓜 at 2017-04-19 17:24:03
我是构了一个His，一个GST，其实不用很纯的蛋白，做好空白对照。

能否进一步交流一下？
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5楼2017-06-05 10:06:23
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