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lindanana

新虫 (著名写手)

[求助] 蛋白脱盐问题 已有6人参与

现有约4 mg糖蛋白（分子量55 kD）的含盐溶液150 mL，溶液体系是2XSDS蛋白电泳缓冲液（即50 mM的Tris、384 mM的甘氨酸、7.34 mM的SDS），想要除盐且尽量减少糖蛋白的损失，活性暂且不考虑，应该用什么方法呢？本人已用过C18 SPE小柱和超滤离心管（截留分子量30 kD），发现效果很差，原因可能是脱盐前先用蛋白旋转浓缩仪进行了浓缩（浓缩温度60度，时间长达一天，浓缩至4毫升左右，发现溶液颜色由无色变为浅绿色），导致有大量的盐析出，再跑电泳时发现条带变很浅甚至消失了，所以超滤离心除盐这条路走不通了；然后又试了试浓缩一段时间（浓缩体积至20 mL），在盐析出前进行C18小柱蛋白脱盐，发现脱盐前有的条带脱盐后又没了，不知道什么原因。
请问各位大神，该怎么脱盐并且进行浓缩呢，可不可以用透析试试，会造成蛋白大的损失吗？谢谢！
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1楼 2017-02-08 13:53:39
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

z周先生

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
本人硕士课题就是做的纯化，楼主的蛋白可以尝试一下GE的填料，型号为G25  具有拖延浓缩的效果。 透析我也做过，但是由于透析袋的质量和精准问题，导致蛋白流失以及透视时间很长，放弃透析这个方案。
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优秀不够，要无法代替
3楼2017-02-10 09:30:31
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用葡聚糖G25或者葡聚糖G15凝胶过滤法脱盐试试吧。脱盐后测电导就可以判断脱盐效果。
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9楼2017-02-10 16:52:35
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

超滤，用相应的膜，不浓缩，直接超滤。
个人建议，先用透析，毕竟这个方法最成熟，虽然耗时，但是简单，容易重复。最重要的是透析袋的选择
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11楼2017-02-12 09:14:40
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646865748

木虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by lindanana at 2017-02-13 15:22:17
谢谢，什么类型的脱盐柱子呢
...

GE就有脱盐柱，我们蛋白类脱盐时就用它，很简单，不需要复杂的仪器

发自小木虫Android客户端
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15楼2017-02-13 17:09:27
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普通回帖

hldj1964

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
凝胶柱除盐效果就不错，收率高，但是会稀释样品．:浓缩用透析袋包埋PEG的办法,脱盐要看你蛋白特性了,盐浓度大还是选择过脱盐柱比较好,透析透干净需要的时间比较长!
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从事科研工作数载，现已退休，有一些经验可以奉献给年轻人，但电脑水平不佳，还需学习。
2楼2017-02-09 08:07:58
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sujiale2015

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用电渗析脱盐试试看
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4楼2017-02-10 10:54:20
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lindanana

新虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sujiale2015 at 2017-02-10 10:54:20
可以用电渗析脱盐试试看

嗯，实验室没有电渗析的装置啊，谢谢！
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5楼2017-02-10 12:19:14
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lindanana

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hldj1964 at 2017-02-09 08:07:58
凝胶柱除盐效果就不错，收率高，但是会稀释样品．:浓缩用透析袋包埋PEG的办法,脱盐要看你蛋白特性了,盐浓度大还是选择过脱盐柱比较好,透析透干净需要的时间比较长!

您好，谢谢你的建议，那您建议我使用哪种填料的脱盐柱呢？
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6楼2017-02-10 12:44:05
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lindanana

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by z周先生 at 2017-02-10 09:30:31
本人硕士课题就是做的纯化，楼主的蛋白可以尝试一下GE的填料，型号为G25  具有拖延浓缩的效果。 透析我也做过，但是由于透析袋的质量和精准问题，导致蛋白流失以及透视时间很长，放弃透析这个方案。

嗯，是G25的葡聚糖凝胶填料吧，那根据我的蛋白含量和溶液体积应该装多长规格的凝胶柱呢？柱子太长会有损失吧。
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7楼2017-02-10 12:57:23
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lindanana

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by z周先生 at 2017-02-10 09:30:31
本人硕士课题就是做的纯化，楼主的蛋白可以尝试一下GE的填料，型号为G25  具有拖延浓缩的效果。 透析我也做过，但是由于透析袋的质量和精准问题，导致蛋白流失以及透视时间很长，放弃透析这个方案。

还有，这个蛋白和盐的临界点怎么判断呢，通过水洗脱后的溶液测蛋白含量吗？
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8楼2017-02-10 13:00:15
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lindanana

新虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hc-material at 2017-02-10 16:52:35
用葡聚糖G25或者葡聚糖G15凝胶过滤法脱盐试试吧。脱盐后测电导就可以判断脱盐效果。

谢谢！
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10楼2017-02-10 18:53:56
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