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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 怎么去除纯化的蛋白中的杂蛋白
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绿松石6727

新虫 (小有名气)

[求助] 怎么去除纯化的蛋白中的杂蛋白 已有1人参与

纯化MBP标签的蛋白，目标蛋白加上标签100KD左右，上柱纯化完之后过50KD超滤离心管，50KD以下的杂蛋白基本上都出去了，但是50到100之间的杂蛋白有很多，但是超滤离心管没有50到100之间的，请问有同学遇到过这种问题吗？怎么解决呢？不胜感激！！！

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1楼 2017-01-23 12:07:15
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-25 19:53:39
你用的什么柱子纯化的？MBP标签是有对应的亲和层析的。纯化用亲和层析最有效。
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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
2楼2017-01-25 10:11:58
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 绿松石6727 at 2017-01-26 11:41:10
用的直链淀粉树脂柱子纯化的，但是用麦芽糖洗下来的有很多杂蛋白
...

后面可以再加一步离子交换试试

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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
4楼2017-01-26 11:46:49
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by keke226 at 2017-01-25 10:11:58
你用的什么柱子纯化的？MBP标签是有对应的亲和层析的。纯化用亲和层析最有效。

用的直链淀粉树脂柱子纯化的，但是用麦芽糖洗下来的有很多杂蛋白

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3楼2017-01-26 11:41:10
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by keke226 at 2017-01-26 11:46:49
后面可以再加一步离子交换试试
...

这个是不是条件比较难摸啊？

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5楼2017-01-27 07:59:33
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
可以先离子层析洗脱，完了再用亲和层析，

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I am not a hero , but I served with heroes！
6楼2017-01-27 08:11:07
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-28 22:24:45
引用回帖:
5楼: Originally posted by 绿松石6727 at 2017-01-27 07:59:33
这个是不是条件比较难摸啊？
...

不难。阴离子用高于你融合蛋白等电点1～2 pH的低盐缓冲液上样，用0.5到1M氯化钠的缓冲液洗脱。阳离子用低于你融合蛋白等电点1～2的pH的低盐缓冲液上样，用0.5到1M氯化钠的缓冲液洗脱。详细步骤可看GE手册。

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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
7楼2017-01-27 08:45:57
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by keke226 at 2017-01-27 08:45:57
不难。阴离子用高于你融合蛋白等电点1～2 pH的低盐缓冲液上样，用0.5到1M氯化钠的缓冲液洗脱。阳离子用低于你融合蛋白等电点1～2的pH的低盐缓冲液上样，用0.5到1M氯化钠的缓冲液洗脱。详细步骤可看GE手册。
...

谢谢！

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8楼2017-01-29 11:44:09
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wlt728 at 2017-01-27 08:11:07
可以先离子层析洗脱，完了再用亲和层析，

谢谢！但是亲和层析完会不会浓度很低呢？

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9楼2017-02-05 20:05:24
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 绿松石6727 at 2017-02-05 20:05:24
谢谢！但是亲和层析完会不会浓度很低呢？
...

不好意思，上个帖子写错了，我是想问，离子层析完会不会浓度很低？

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10楼2017-02-05 20:06:35
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