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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 药物在鼠肝微粒体体系中，不反应，峰面积反而增加了一倍
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小小丫头爱

银虫 (小有名气)

[求助] 药物在鼠肝微粒体体系中，不反应，峰面积反而增加了一倍 已有4人参与

最近在做一个化学物质在大鼠肝脏微粒体的代谢实验，出现了一个很神奇的现象，就是物质加入肝微粒体后直接加乙腈沉淀蛋白后，进高效液相分析发现，物质的峰面积比相同浓度下的物质峰大了一倍！这根本都不符合常理，首先操作应该是没问题的，我重复过好几天，后来让一个博士师姐看我操作的，操作没问题。
由于物质加到微粒体孵育体系中，发现物质并没有代谢，反而面积增大一倍，然后为了找出这个问题的原因，我已经排除了NADPH、PBS、蛋白微粒体、乙腈的原因，最后发现单独测物质的峰面积为400出峰时间为9.3，单独测孵育体系峰面积为0，物质加到孵育体系中，不反应直接加乙腈沉淀蛋白，峰面积为700出峰时间为8.5，峰发生了前移，峰面积扩大了一倍。这究竟是什么原因？？哪位大神能给指点一二？拜托了！跪求！！！！
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慎终如始
1楼 2017-01-22 15:15:29
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

llw1986

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

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小小丫头爱: 金币+20, ★★★很有帮助 2017-01-24 14:35:48
楼主你的意思是不是说当你直接测neat溶液的时候峰面积为400， RT为9.3，而当把待测物加入到LM体系中而不加NADPH直接终止反应这时候测到的峰面积为700是不是这个样子？那我有两点问题问下第一就是你这个化合物的溶解度怎么样？如果溶解度不是很好的话你这个就可以解释为微粒体对化合物的溶解度有一定的帮助加进去后又溶解了一些所以造成你这个现象。第二个问题就是你有没有确定你仪器的状态是不是有哪里漏液或者定量环或者进样针有堵塞的地方造成吸样不准确呢？我做微粒体稳定性的时候有遇到过不代谢反而增多的现象，不知道你遇到过没有，希望能一起交流下。
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2楼2017-01-22 16:45:27
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zw0123456789zw

至尊木虫 (职业作家)

Felix Baumgartner Space Jump

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小小丫头爱 at 2017-01-24 16:17:27
我也考虑过是不是物质发生了变化，但是想想又觉得不太可能，因为物质本身是盐，PBS也是盐溶液，两者应该不可能发生反应。是不是因为PH值不同，导致目标物质发生了变化！...

物质本身是盐？？什么盐？无机盐？酸碱中和反应后的有机盐？
做质谱分析看看，可以比较快的判断发生变化的两个峰之间有何不同。
楼主的分析pH也有道理，问题是峰面积变化有这么大？？
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7楼2017-01-24 19:19:46
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普通回帖

zw0123456789zw

至尊木虫 (职业作家)

Felix Baumgartner Space Jump

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
小小丫头爱: 金币+20 2017-01-24 15:02:35
建议做质谱检测一下9.3, 8.5 min 色谱峰分子量，看是不是一个物质。

然后再考虑其他情况。
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小小丫头爱
3楼2017-01-23 13:27:49
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小小丫头爱

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by llw1986 at 2017-01-22 16:45:27
楼主你的意思是不是说当你直接测neat溶液的时候峰面积为400， RT为9.3，而当把待测物加入到LM体系中而不加NADPH直接终止反应这时候测到的峰面积为700是不是这个样子？那我有两点问题问下第一就是你这个化合物的溶解 ...

你提到的问题我都考虑过了 1目标物在水中的溶解度是20mg/ml,2 仪器绝对没问题 仪器是公用的，别人的峰面积都没事，而且我这个现象经得起重复，我现在也在怀疑目标物的溶解度的问题，因为超纯水和PBS的PH是不同的，我测得纯化水的PH值为5,PBS的PH值为7，是不是由于PH值改变了，所以导致目标物质发生了变化，峰面积变大了一倍，出峰时间也提前了1分钟
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慎终如始
4楼2017-01-24 14:40:31
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llw1986

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小小丫头爱 at 2017-01-24 14:40:31
你提到的问题我都考虑过了 1目标物在水中的溶解度是20mg/ml,2 仪器绝对没问题 仪器是公用的，别人的峰面积都没事，而且我这个现象经得起重复，我现在也在怀疑目标物的溶解度的问题，因为超纯水和PBS的PH是不同的， ...

哦 这样啊 你说的情况也是非常有可能的，化合物的溶解度在不同的PH值环境中溶解度也是不一样的。那你的化合物是哪一类的会不会是化合物本身性质导致的呢，再或者LM对化合物的基质效应的影响呢？如果你怀疑是PH的原因可以试验试一下，看看是否会有影响。我的实验也是都是那一类型会发生我说的那个现象，其他都没有。最后我们就只能归结为化合物本身的性质导致的
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5楼2017-01-24 16:14:31
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小小丫头爱

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by zw0123456789zw at 2017-01-23 13:27:49
建议做质谱检测一下9.3, 8.5 min 色谱峰分子量，看是不是一个物质。

然后再考虑其他情况。

我也考虑过是不是物质发生了变化，但是想想又觉得不太可能，因为物质本身是盐，PBS也是盐溶液，两者应该不可能发生反应。是不是因为PH值不同，导致目标物质发生了变化！
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慎终如始
6楼2017-01-24 16:17:27
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bigpalewolf

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些化合物很不稳定， 会不需要NADPH提供H， 你做一个直接沉蛋白然后再加化合物的对照试一下。 RT提前我觉得是个代谢物。。。
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8楼2017-01-25 02:46:34
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laigei

至尊木虫 (知名作家)

倭贼虽死 华难未已
祝贺祝福！科研最难得的事情，就是意外的惊喜。

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天底下从无秘密，有人故意隐瞒事实，有人甘愿闭着眼睛。
9楼2017-01-25 05:15:36
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莫々

金虫 (小有名气)
做过相关实验，你的标准物质和肝微粒体反应后的物质是在同种溶剂下检测的吗

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10楼2017-01-25 07:32:11
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