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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 对与模版浓度很低进行扩增，无果，求指教。
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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 对与模版浓度很低进行扩增，无果，求指教。 已有3人参与

各位大神们，我现在在扩一个DNA浓度特别低的基因组，扩了N遍都扩不出来，预期目的片段大小为500bp，按照以下体系扩的，根据文献资料查的……如图所示。求指教

对与模版浓度很低进行扩增，无果，求指教。


@biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2017-01-19 22:11:42
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浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
推荐用Vazyme的高产量PCR的Taq Plus，挺不错的
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9楼2017-01-20 11:04:30
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小狼崽?

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by 豆豆逗儿 at 2017-01-20 08:57:13
引物是
...

初步判定模板浓度低导致的，可以做个50ul 大体系的touchdown

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10楼2017-01-21 07:33:01
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你可以做个温度的递减，觉得你的退货温度不高啊。有没有引物序列看看。
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
11楼2017-01-23 11:46:51
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yt7777

金虫 (小有名气)
楼主P了n遍都是什么样的条件？

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豆豆逗儿
2楼2017-01-19 22:28:37
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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by yt7777 at 2017-01-19 22:28:37
楼主P了n遍都是什么样的条件？

换了好点的酶，重新提了dna，浓度低，但是跑胶依然有条带啊，而且od值也是范围之内，还有减少酶，增大扩的次数，这些都依次改变过，还是不行啊，最气人的是之前扩出来过一次，从那一次以后，再也扩不出来，下面是我之前扩出来的，
对与模版浓度很低进行扩增，无果，求指教。-1



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3楼2017-01-19 22:41:02
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yt7777

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 豆豆逗儿 at 2017-01-19 22:41:02
换了好点的酶，重新提了dna，浓度低，但是跑胶依然有条带啊，而且od值也是范围之内，还有减少酶，增大扩的次数，这些都依次改变过，还是不行啊，最气人的是之前扩出来过一次，从那一次以后，再也扩不出来，下面是我 ...

楼主说的之前p出来一次，那次的体系条件是什么样的？

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4楼2017-01-19 22:51:58
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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)
模版，5微升，mix8.75，双蒸水10.25，引物各0.5，然后退火温度做了梯度41.4到57.1扩增条件跟图中的是一样的

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5楼2017-01-19 23:00:44
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小狼崽?

新虫 (初入文坛)
模板有电泳图吗？引物具体信息有吗？mix是哪种！

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6楼2017-01-20 07:33:10
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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)
对与模版浓度很低进行扩增，无果，求指教。-2

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7楼2017-01-20 08:55:37
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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小狼崽? at 2017-01-20 07:33:10
模板有电泳图吗？引物具体信息有吗？mix是哪种！

引物是

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8楼2017-01-20 08:57:13
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