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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 对与模版浓度很低进行扩增,无果,求指教。 已有3人参与

各位大神们,我现在在扩一个DNA浓度特别低的基因组,扩了N遍都扩不出来,预期目的片段大小为500bp,按照以下体系扩的,根据文献资料查的……如图所示。求指教

对与模版浓度很低进行扩增,无果,求指教。


@biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端
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浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
推荐用Vazyme的高产量PCR的Taq Plus,挺不错的
9楼2017-01-20 11:04:30
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小狼崽?

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by 豆豆逗儿 at 2017-01-20 08:57:13
引物是
...

初步判定模板浓度低导致的,可以做个50ul 大体系的touchdown

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10楼2017-01-21 07:33:01
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你可以做个温度的递减,觉得你的退货温度不高啊。有没有引物序列看看。
脚踏实地:遇一个,学一个,会一个。。。
11楼2017-01-23 11:46:51
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yt7777

金虫 (小有名气)

楼主P了n遍都是什么样的条件?

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-01-19 22:28:37
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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by yt7777 at 2017-01-19 22:28:37
楼主P了n遍都是什么样的条件?

换了好点的酶,重新提了dna,浓度低,但是跑胶依然有条带啊,而且od值也是范围之内,还有减少酶,增大扩的次数,这些都依次改变过,还是不行啊,最气人的是之前扩出来过一次,从那一次以后,再也扩不出来,下面是我之前扩出来的,
对与模版浓度很低进行扩增,无果,求指教。-1



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3楼2017-01-19 22:41:02
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yt7777

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 豆豆逗儿 at 2017-01-19 22:41:02
换了好点的酶,重新提了dna,浓度低,但是跑胶依然有条带啊,而且od值也是范围之内,还有减少酶,增大扩的次数,这些都依次改变过,还是不行啊,最气人的是之前扩出来过一次,从那一次以后,再也扩不出来,下面是我 ...

楼主说的之前p出来一次,那次的体系条件是什么样的?

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4楼2017-01-19 22:51:58
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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)

模版,5微升,mix8.75,双蒸水10.25,引物各0.5,然后退火温度做了梯度41.4到57.1扩增条件跟图中的是一样的

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5楼2017-01-19 23:00:44
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小狼崽?

新虫 (初入文坛)

模板有电泳图吗?引物具体信息有吗?mix是哪种!

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6楼2017-01-20 07:33:10
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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)

7楼2017-01-20 08:55:37
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豆豆逗儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小狼崽? at 2017-01-20 07:33:10
模板有电泳图吗?引物具体信息有吗?mix是哪种!

引物是

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8楼2017-01-20 08:57:13
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