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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于割胶回收后PCR扩增的问题
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neuwzz

[交流] 关于割胶回收后PCR扩增的问题

用两个引物扩增后，对目标大小的条带割胶回收，我们是上样的10微升，回收后40微升，不稀释，取0.4微升进行pcr，pcr体系是25微升
再用这两个引物进行扩增，有时候是两端引物出带，单引物不出带，这样还算让人满意
但有时候却是两端引物出条带，其中一个单引物扩增也出条带，而且和双引物出带差不多，奇怪的是用内轮引物也会出条带，内轮引物出的大小和该出的条带大小一致
对这个感到很难以理解，这种情况遇到好几次了，谁能解释下么，谢谢

[ Last edited by neuwzz on 2008-12-20 at 17:05 ]
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1楼 2008-12-14 17:36:56
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xxh8372
★ ★
neuwzz(金币+1,VIP+0):
neuwzz(金币+1,VIP+0):
2楼2008-12-14 17:50:08
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kousyouki

铁虫 (小有名气)
★
neuwzz(金币+1):谢谢参与
那回收的就是那么长，单引物也能合成你的目的片段的呀~~
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3楼2009-01-17 06:10:42
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
neuwzz(金币+1):谢谢参与
不对称PCR
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4楼2009-01-17 10:11:28
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xmdbok2000

木虫 (正式写手)
★
neuwzz(金币+1):谢谢参与
不懂,帮顶!!
希望懂行的高手能来解决!!
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5楼2009-01-17 11:09:31
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gr0613

铁虫 (初入文坛)
★
neuwzz(金币+1):谢谢参与
我也遇到过。后来不了了之了，有知道的来啊
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6楼2009-01-17 14:21:51
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2004371310

木虫 (著名写手)
★
neuwzz(金币+1):谢谢参与
会不会是你的目的序列有很多相似的位点能够与引物结合啊？
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7楼2009-01-17 22:09:20
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★
neuwzz(金币+1):谢谢参与
没有完全领会楼主的意思
首先指出引物应该是以“对”出现，要是特指某一条应该说5`或3`
“内轮引物”是什么意思
“有时候”指的是同一体系同样条件吗，还是换了模板和引物，
有没有相关图片能够放上来让大家帮着判断
希望楼主说的更清晰一些，因为对你描述的现象很感兴趣
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8楼2009-01-19 16:59:37
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
neuwzz(金币+1):谢谢参与
割胶的时候污染了吧?
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9楼2009-01-20 13:14:29
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futileflank

金虫 (正式写手)
★
neuwzz(金币+1):谢谢参与
回收后有没有测浓度啊？
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10楼2009-01-20 13:28:22
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