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小李纸11

银虫 (正式写手)

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[求助] 关于毕赤酵母表达时线性化酶的选择依据？已有1人参与

最近在用毕赤酵母表达外源基因，用的质粒是pPICZA，宿主菌是毕赤酵母X33，在线性化的时候，发现我的目的片段上有SacI酶切位点，所以不能用SacI线性化，结果就用SalI线性化了，现在想知道这个线性化酶的选择跟质粒载体还是菌株有关呢？看了X33是野生型，而常用的GS115是His+型，表达手册也是以GS115为例做的详解，那我用SalI线性化质粒是否合理呢？不知道其中原理。

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1楼 2017-01-16 20:55:27

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新虫 (初入文坛)

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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-01-25 19:54:22

毕赤酵母载体是整合型，载体通过其实上含有的与菌株同源的片段进行重组：重组方式很多种，重组位点有启动子区，如AOX1，GAP等，含有3‘AOX1 TT区，还有His Maker区。我现在用的载体不含有His，所以我就在启动子上酶切线性化-AOX1或者GAP上。这个酶切位点的选择要看你的载体上有哪些位点是菌株的同源区，在同源区酶切就可以了。