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qinjuan

新虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白变性复性 已有3人参与

蛋白出现在沉淀中，想要通过urea,guanidine 重折叠，总是失败，求助各位大神（ ＴДＴ）

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1楼 2017-01-14 10:05:11
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王世玉

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最近也在做原核表达，不顺利。。
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2楼2017-01-14 11:10:31
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qinjuan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王世玉 at 2017-01-14 11:10:31
最近也在做原核表达，不顺利。。

你具体是做什么的

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3楼2017-02-01 12:36:52
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X小天T

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-01 22:37:14
尿素浓度梯度复性，梯度小一点，另可以加入适量甘油（1%或者0.5）或者甘氨酸，要是再不行，就原核表达的时候低温诱导表达（原因参考包涵体的形成）。蛋白复性是个复杂的过程如果还是不行就考虑表达的时候加分子伴侣或者放弃这个蛋白。个人建议，祝顺利！

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4楼2017-02-01 18:58:42
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qinjuan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by X小天T at 2017-02-01 18:58:42
尿素浓度梯度复性，梯度小一点，另可以加入适量甘油（1%或者0.5）或者甘氨酸，要是再不行，就原核表达的时候低温诱导表达（原因参考包涵体的形成）。蛋白复性是个复杂的过程如果还是不行就考虑表达的时候加分子伴侣 ...

谢谢你。我换了一种感受态低温诱导，可溶部分明显增加，但是过完第一根镍柱就不见了，图谱可以看到峰，但SDS胶上没条带，不知道怎么回事。

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5楼2017-02-27 16:48:15
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木子Jimmy

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by X小天T at 2017-02-01 18:58:42
尿素浓度梯度复性，梯度小一点，另可以加入适量甘油（1%或者0.5）或者甘氨酸，要是再不行，就原核表达的时候低温诱导表达（原因参考包涵体的形成）。蛋白复性是个复杂的过程如果还是不行就考虑表达的时候加分子伴侣 ...

我采用的是梯度复性，蛋白没有出现沉淀，但是作为结构蛋白（外膜蛋白），如何考察复性率呢？蛋白含有二硫键，怎么确定复性成功？
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6楼2017-02-27 17:18:54
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X小天T

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by qinjuan at 2017-02-27 16:48:15
谢谢你。我换了一种感受态低温诱导，可溶部分明显增加，但是过完第一根镍柱就不见了，图谱可以看到峰，但SDS胶上没条带，不知道怎么回事。
...

能确认就是你的目的蛋白峰吗？沉淀有没有一块跑胶检测？过镍柱时洗脱浓度有没有摸索？或者你把过镍柱后的蛋白液浓缩一下再跑胶看看

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7楼2017-02-27 22:29:15
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X小天T

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 木子Jimmy at 2017-02-27 17:18:54
我采用的是梯度复性，蛋白没有出现沉淀，但是作为结构蛋白（外膜蛋白），如何考察复性率呢？蛋白含有二硫键，怎么确定复性成功？...

https://baike.1688.com/doc/view-d29522542.html 参考这个看一下，希望对你有帮助。

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8楼2017-02-27 22:35:44
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