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求助！关于蛋白表达量以及产量的测定 已有1人参与
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我想要知道每次发酵一定体积的菌液 能够产生多少我的目的蛋白 现在想要制定一个准确的定量方法 我个人的理解是： （1）关于目的蛋白表达量：利用SDS-PAGE跑全菌电泳 然后用灰度扫描软件进行条带灰度扫描 可以大致确定目的蛋白占全菌蛋白的百分比 但是存在的问题是：这种方法定量很不准确 并且我至今也没有发现一个好用的灰度扫描软件 软件对于条带的标记会因为电泳效果产生较大误差 不该标记的条带会被标记 该标记的往往找不到等等 （2）关于蛋白的产量：取一定量的菌按照一定的方法进行纯化得到我们的目的蛋白 然后测得蛋白浓度 反推计算出全部发酵液能产多少蛋白 以上是我的理解 但是现在的问题是由于一些原因我没法进行纯化的实验 但我希望知道用什么方法能较准确测定我这一批发酵液产的蛋白量 请各位大神给一个思路 谢谢 |
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