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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 如何保证提取质粒DNA的完整性
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hnnydx

木虫 (著名写手)

[交流] 如何保证提取质粒DNA的完整性 已有2人参与

如何保证提取质粒DNA的完整性，需要注意什么？
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1楼 2017-01-09 15:01:59
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hch123

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的这个角度还真没想过啊，一般不都是说怎么样避免基因组DNA污染吗？等待大神解答！！！
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
2楼2017-01-10 16:33:46
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月夜听雨0323

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
额，我做实验一般都是用提质粒的试剂盒的，但是这里可以回答下怎么验证提取出来的质粒是否完整
验证方法：
    琼脂糖电泳进行鉴定质粒DNA时，多数情况是三条带，碱法抽提得到质粒样品中不含线性 DNA，线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样。快到慢而排序：超螺旋、开环和复制中间体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起）。如果在溶液II加入后过度振荡，会有第四条带，这条带泳动得较慢，远离这三条带，是20-100kb的大肠杆菌基因组DNA的片断。非常偶然的是，有时候抽提到的质粒会有7－10条带，这是由于特殊的DNA序列导致了不同程度的超螺旋（超螺旋的圈数不同）所致。
    临床多重耐药菌株的质粒，采用的是也是碱裂解法，电泳结果是有很多条带的。临床菌株有大小不同质粒，有的多达10多条，像marker一样。也有的临床菌株只有1条带。
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3楼2017-01-11 10:43:25
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