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hnnydx木虫 (著名写手)
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如何保证提取质粒DNA的完整性 已有2人参与
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| 如何保证提取质粒DNA的完整性,需要注意什么? |
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2楼2017-01-10 16:33:46
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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额,我做实验一般都是用提质粒的试剂盒的,但是这里可以回答下怎么验证提取出来的质粒是否完整 验证方法: 琼脂糖电泳进行鉴定质粒DNA时,多数情况是三条带,碱法抽提得到质粒样品中不含线性 DNA,线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样。快到慢而排序:超螺旋、开环和复制中间体(即没有复制完全的两个质粒连在了一起)。如果在溶液II加入后过度振荡,会有第四条带,这条带泳动得较慢,远离这三条带,是20-100kb的大肠杆菌基因组DNA的片断。非常偶然的是,有时候抽提到的质粒会有7-10条带,这是由于特殊的DNA序列导致了不同程度的超螺旋(超螺旋的圈数不同)所致。 临床多重耐药菌株的质粒,采用的是也是碱裂解法,电泳结果是有很多条带的。临床菌株有大小不同质粒,有的多达10多条,像marker一样。也有的临床菌株只有1条带。 |
3楼2017-01-11 10:43:25











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