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lp5ypeng

新虫 (初入文坛)

[求助] WB试验中,内源性蛋白能出条带,带tag的出不来条带 已有3人参与

最近在做WB,我在HEK-293T中转染带tag的目的质粒后,用提取的蛋白跑WB,
结果总是用特异性抗体的有条带,但是用anti-Tag的抗体没有条带,
被这个问题困住了两三个月了,实验也没法往下进行。
把详细操作步骤跟老板对过了,老板也觉得没问题,他也想不出问题出在哪里,要愁死了。
有人遇到过这种情况吗?
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徐胜亚

新虫 (初入文坛)

我也是,而且我的特异性抗体杂带多,没办法判断结果啊

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2楼2017-01-06 10:14:15
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KKHYYc

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也遇到过这种情况,我觉得只能把标签换一下位置,C端和N端都试试,可能是由于你的蛋白的某一端的结构将标签包裹,而不能暴露标签的结合位点造成的。
3楼2017-01-06 10:57:00
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有表达吧,要么转染效率太低,要么表达效率太低
4楼2017-01-06 11:51:20
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

是不是houzahui构建载体的时候没有去掉终止密码子?

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特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
5楼2017-01-30 21:50:56
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15198028797

新虫 (初入文坛)

我也是,ha tag始终做不出来

发自小木虫Android客户端
6楼2017-08-22 12:18:17
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cy20052411

新虫 (小有名气)

没表达,要么抗体有问题

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7楼2017-10-12 17:59:55
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cheryl呀

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你什么tag,先确定能不能表达。。
8楼2017-10-19 03:29:12
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