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六维空想

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[求助] 关于在目的基因两端加酶切位点已有1人参与

我的目的基因是连在pu57载体上的两端有酶切位点现在想把它从pu57上克隆下来并加上新的酶切位点设计好引物后经过pcr 连接t载体测序发现两端还是以前的酶切位点但是我的引物已经换了酶切位点的为什么会这样啊已经重复好几次都是一样的结果

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1楼 2017-01-04 09:47:37

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peitaokong

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

按理说你的思路是没有什么问题，如果你这种方法行不通。我有一个建议，你可以参考一下。你可以设计一对不加酶切位点的引物，用保真性比较好的酶，扩pcr，然后以pcr产物为模板，换用新的酶切位点的一对引物来扩。希望能够帮助你。

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2楼2017-01-04 11:07:18

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六维空想

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引用回帖:

2楼: Originally posted by peitaokong at 2017-01-04 11:07:18
按理说你的思路是没有什么问题，如果你这种方法行不通。我有一个建议，你可以参考一下。你可以设计一对不加酶切位点的引物，用保真性比较好的酶，扩pcr，然后以pcr产物为模板，换用新的酶切位点的一对引物来扩。希望 ...

我也准备这么做引物已经在合成了不知道这样行不行

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3楼2017-01-04 12:40:13

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