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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于在目的基因两端加酶切位点
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六维空想

新虫 (小有名气)

[求助] 关于在目的基因两端加酶切位点 已有1人参与

我的目的基因是连在pu57载体上的  两端有酶切位点  现在想把它从pu57上克隆下来并加上新的酶切位点   设计好引物后  经过pcr 连接t载体测序  发现两端还是以前的酶切位点  但是我的引物已经换了酶切位点的  为什么会这样啊  已经重复好几次 都是一样的结果

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1楼 2017-01-04 09:47:37
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按理说你的思路是没有什么问题，如果你这种方法行不通。我有一个建议，你可以参考一下。你可以设计一对不加酶切位点的引物，用保真性比较好的酶，扩pcr，然后以pcr产物为模板，换用新的酶切位点的一对引物来扩。希望能够帮助你。
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2楼2017-01-04 11:07:18
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六维空想

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2017-01-04 11:07:18
按理说你的思路是没有什么问题，如果你这种方法行不通。我有一个建议，你可以参考一下。你可以设计一对不加酶切位点的引物，用保真性比较好的酶，扩pcr，然后以pcr产物为模板，换用新的酶切位点的一对引物来扩。希望 ...

我也准备这么做  引物已经在合成了  不知道这样行不行

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3楼2017-01-04 12:40:13
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 六维空想 at 2017-01-04 12:40:13
我也准备这么做  引物已经在合成了  不知道这样行不行
...

能够扩出来，应该问题就不大。
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4楼2017-01-04 12:43:11
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