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新虫 (初入文坛)

[求助] 镍柱纯化蛋白有杂带怎么办 已有1人参与

求助各位大神,最近在镍柱纯化蛋白,用的是NZ9000体系,蛋白大小为32KD,总是在15KD左右有条杂带,和我要的蛋白洗脱浓度一样样的,感觉和镍柱也结合的很好啊。。。。试过二次纯化,但是也不行。怎么办呢?图中从右至左依次是Marker 、总蛋白、洗脱液、50mM咪唑、100mM咪唑、150mM咪唑、200mM咪唑、250mM咪唑、500mM咪唑第一次、500mM咪唑第二次。想问一下如果接着用10KD的超滤离心柱离心,能把那个小的杂蛋白离掉吗?

镍柱纯化蛋白有杂带怎么办
003.jpg
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淘七九懒

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

楼主,你可以在低浓度咪唑多进行洗脱,在确定能洗脱的咪唑浓度下保留一段时间洗脱
9楼2017-01-06 15:32:43
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刘志华

金虫 (正式写手)

是不是可以改良一下你washing buffer的PH,看看有没有效果

发自小木虫Android客户端
每天都会有新的惊喜
2楼2017-01-03 13:25:05
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1137977621

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 刘志华 at 2017-01-03 13:25:05
是不是可以改良一下你washing buffer的PH,看看有没有效果

我现在pH用的是7.4, 要怎么改呢?再小一点还是大一点?
3楼2017-01-03 13:38:59
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

二次纯化用的什么方法?也是镍柱?

感觉你每种咪唑浓度都有目的蛋白掉下来
4楼2017-01-03 16:47:42
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