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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 请问三片段的overlap可以做吗
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shi6625893

金虫 (小有名气)

[交流] 请问三片段的overlap可以做吗 已有6人参与

我有三片段分别为1100左右bp，939bp和1100左右bp，做重叠延伸，没成功，请问三片段的overlap可以做吗，还是要两片段两片段的做？有没有人做过，有什么经验?谢谢！
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1楼 2016-12-31 14:31:52
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草溪河

铁虫 (著名写手)
★
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两两做吧，或者用infusion吧

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2楼2017-01-02 19:44:31
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以一起做，不行的话再分开做。

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3楼2017-01-02 19:46:00
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yueyiweihan

新虫 (初入文坛)
★
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可以算好比例，两两一起做，让两个片段的p mol（计算可以用公式ng*1000/650/碱基数）相同，做好两个后再和第三个算好接着做。比较简单的是用Gibson体系，可以直接把3个片段和载体一步连接好。
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4楼2017-01-04 16:23:06
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C小杨

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以，再多几个都可以做
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5楼2017-01-04 17:10:58
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小静儿000

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你可以用诺唯赞的同源重组试剂盒有一款是可以做多片段的，你的片段这么小肯定很好做，我的四个基因总共12k都做成功了，祝你好运
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6楼2017-01-05 14:52:31
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xiemin217

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以做，关键是退火，必须三个片段可以连在一起

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7楼2017-01-05 15:42:45
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