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芯尹

[交流] 关于电泳蛋白质 marker

各位早上好,本人是电泳新手,由于身边无人详细指导,有问题请教大家:
最近我做蛋白质电泳,初试已经跑出条带,文献当中参考条带蛋白质分子量分别为130KD 85KD 65KD 60KD 15KD ,这些是主要蛋白。所以需要marker来验证一下,商家介绍了116kD-14.4KD进口的和上海生产97KD-14.4KD这两种,由于进口的比较贵非预染的400块钱,后者量比前者少,大约100。我比较倾向于后者,这种marker听说曾经用的人比较多,但由于出现过问题现在用量减少,不知现在质量怎么样?还有它是非预染marker,请问要怎样处理?再有就是介绍单上说明建议分离胶浓度为12%,不知10%是否可以?建议用考马斯亮蓝R-200染色,不知用G-200是否可以? 如果可以用上样量多少为最合适?非常感谢!!
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guxinhan123

银虫 (正式写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
marker一般就行,也没必要花那么多钱非买个进口的,我一直都是用国产的,效果还可以。

[ Last edited by guxinhan123 on 2008-12-11 at 11:33 ]
3楼2008-12-11 11:30:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
lwf991229(金币+1,VIP+0):3Q`
看来不是跑western而只是普通的SDS-PAGE
所以marker是否预染就无所谓了,可以靠溴酚蓝的位置用经验判断
非预染的话就跟普通染色一样染了
上样量得看提取的蛋白浓度了,一开始不清楚就上个梯度
R-250用得多,但染小分子有人建议用G-250(不是你提的200)
分离胶你的浓度视你的蛋白而定
浓胶分离小分子比较好,稀胶分离大分子比较好
2楼2008-12-11 10:15:26
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liuxixia

新虫 (正式写手)

顶下


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
其实选择国产还是进口marker没什么关系的,只要你用的好就可以,其实我做的时 候不管是SDS-Page还是western都是用一般的marker 效果很好,另外你买marker 的时候会带说明书交代你该怎么处理,这个问题也不用担心,另外胶浓度的确定你可以根据文献查到的在自己摸索下就可以了 ,我用的是takara的蛋白marker,价格是260,你可以直接上网站查是否合适。
4楼2008-12-11 11:49:18
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jasco

木虫 (正式写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
我一直用fermentas的非预染marker跑sds page,感觉不错
5楼2008-12-11 17:51:36
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