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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于电泳蛋白质 marker
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芯尹

[交流] 关于电泳蛋白质 marker

各位早上好，本人是电泳新手，由于身边无人详细指导，有问题请教大家：
最近我做蛋白质电泳，初试已经跑出条带，文献当中参考条带蛋白质分子量分别为130KD 85KD 65KD 60KD 15KD ，这些是主要蛋白。所以需要marker来验证一下，商家介绍了116kD-14.4KD进口的和上海生产97ＫＤ－１４.４ＫＤ这两种，由于进口的比较贵非预染的４００块钱，后者量比前者少，大约１００。我比较倾向于后者，这种marker听说曾经用的人比较多，但由于出现过问题现在用量减少，不知现在质量怎么样？还有它是非预染marker,请问要怎样处理？再有就是介绍单上说明建议分离胶浓度为12%，不知10%是否可以？建议用考马斯亮蓝R-200染色，不知用G-200是否可以？ 如果可以用上样量多少为最合适？非常感谢！！
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1楼 2008-12-11 08:48:24
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
lwf991229(金币+1,VIP+0):3Q`
看来不是跑western而只是普通的SDS-PAGE
所以marker是否预染就无所谓了，可以靠溴酚蓝的位置用经验判断
非预染的话就跟普通染色一样染了
上样量得看提取的蛋白浓度了，一开始不清楚就上个梯度
R-250用得多，但染小分子有人建议用G-250（不是你提的200）
分离胶你的浓度视你的蛋白而定
浓胶分离小分子比较好，稀胶分离大分子比较好
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2楼2008-12-11 10:15:26
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guxinhan123

银虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
marker一般就行，也没必要花那么多钱非买个进口的，我一直都是用国产的，效果还可以。

[ Last edited by guxinhan123 on 2008-12-11 at 11:33 ]
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3楼2008-12-11 11:30:31
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liuxixia

新虫 (正式写手)

顶下

★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
其实选择国产还是进口marker没什么关系的，只要你用的好就可以，其实我做的时 候不管是SDS-Page还是western都是用一般的marker 效果很好，另外你买marker 的时候会带说明书交代你该怎么处理，这个问题也不用担心，另外胶浓度的确定你可以根据文献查到的在自己摸索下就可以了 ，我用的是takara的蛋白marker，价格是260，你可以直接上网站查是否合适。
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4楼2008-12-11 11:49:18
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jasco

木虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
我一直用fermentas的非预染marker跑sds page，感觉不错
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5楼2008-12-11 17:51:36
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
呵呵，r-250吧，G-250是蛋白质定量用的。
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6楼2008-12-11 18:07:33
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liubang8355

金虫 (小有名气)
根据你自己蛋白的分子量确定买高分子量MARKER还是低分子量MARKER，一般SDSPAGE用普通的MARKER 已经足够了，处理方法说明书上都有
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7楼2008-12-11 20:52:34
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hanshen81

金虫 (正式写手)
同意楼上的，买蛋白marker前要先确定你的目的蛋白大小在蛋白marker分子范围内，其次考虑价格，如果只是做SDS PAGE,用普通marker就可以了，不用预染marker,后者是做western blot的。
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8楼2008-12-12 19:14:22
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