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匍匐前进

新虫 (初入文坛)

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[求助] 原核表达融合His蛋白，考马斯可见条带，western检测不出啦已有2人参与

用PET20-b,表达his融合蛋白，考马斯亮蓝可以看到表达条带，western检测HIS标签，却杂不出来，有什么指导经验吗

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1楼2016-12-29 16:14:33

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bush119

木虫 (职业作家)

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引用回帖:

8楼: Originally posted by 匍匐前进 at 2016-12-29 21:43:09
转膜完全了，转完膜之后的胶考马斯染色看没有条带了，同样的方法表达的另一个相近大小的蛋白western可以检测出来，一张膜，重复两次都是这样...

如果你在一张膜上做了平行的一个蛋白比如32a空载体表达的硫氧还原蛋白（同样带His标签）同样的His标签可以检测出来那么问题就来了
首先我怀疑你这个目的蛋白是否表达
第二如果表达你设计的HIs标签是在氨基酸序列的尾部还是中段还是起始位置
第三上样电泳之前是否加彻底处理成为一级结构（有比较小的可能His标签包裹在蛋白内部，看His标签位置）