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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » pET28a空质粒双酶切出现两条带
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jinshengfang

木虫 (正式写手)

[交流] pET28a空质粒双酶切出现两条带 已有5人参与

我的pET28a质粒利用NdeI和XhoI双酶切，出现两条带，这是怎么回事？
第一是marker 5000bp
第二条带 pET28a酶切前
第三 pET28a酶切后

pET28a空质粒双酶切出现两条带
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阿门阿前1991

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生物催化
1楼 2016-12-28 13:45:32
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四月无央

新虫 (小有名气)
★
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不知道为什么你的图片看不了大图，首先pET-28a是5.4kb，如果有大一点的marker，下次还是换一个大一点，10kb marker应该很常见。然后，质粒带像酶切或的，未酶切的质粒应该是会出现三条带。然后，这两个酶切位点在多克隆位点两端，会将多克隆位点切下，好像还会切下一条his尾巴，所以可能上面一条只有单切。NdeI的酶不知道你用的那个公司的，我一直感觉这个酶活性不是很高，建议实验时，先用NdeI单切，然后胶回收，然后再XhoI切，但这样你出发的质粒量要大一点。

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2楼2016-12-28 20:18:52
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没有酶切干净，最好跑长时间分离

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3楼2016-12-28 23:08:23
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轩云飞

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第三条有可能是没完全切吧

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4楼2016-12-29 10:39:42
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binglanhuayu

新虫 (初入文坛)
★
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没有充分切除干净，只要切除带的大小合适即可
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5楼2016-12-29 15:54:27
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阿门阿前1991

金虫 (小有名气)
★
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可能没有酶切完，时间延长一点试试。
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总会出现一个温柔的人，让你变得温暖，然后默默离开。
6楼2016-12-30 08:56:25
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