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zgmmyp

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 447.2
帖子: 81
在线: 78.2小时
虫号: 226486
注册: 2006-03-23
性别: GG
专业: 临床分子生物学检验

[交流] 组织匀浆！！！！弱弱的问题！但是很急！谢谢各位大侠！

组织匀浆！！！！弱弱的问题！但是很急！谢谢各位大侠！
我要研究鱼类肝脏组织内的蛋白质，是一种在肝脏内合成然后分泌到血液中的蛋白质。我想取肝脏制成匀浆，跑SDS-PAGE观察。这种蛋白对热比较敏感。在这里想请教各位大侠，我用什么匀浆方法比较好？用PMSF做蛋白酶抑制剂可以吗？制备匀浆的时候用什么匀浆缓冲液比较好？
谢谢各位！！

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烦躁已经有5人回复
寻找合作团队已经有4人回复

1楼 2008-12-10 14:22:10

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

BioEPI: 3
应助: 1 (幼儿园)
贵宾: 0.021
金币: 7298.5
散金: 9
红花: 13
帖子: 4032
在线: 224.7小时
虫号: 551611
注册: 2008-04-27
性别: GG
专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受

★
zgmmyp(金币+1):谢谢参与

用液氮研磨，这是最常用的方法，而且也非常彻底，同时还能防止蛋白降解
要用超声，就必需保证容器与冰水重复接触防止局部升温太高
PMSF可以用，要新制的，因为PMSF在水相中的半衰期很短（以分钟计的……忘了多少，似乎30min）

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4楼2008-12-11 10:21:07

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winfly

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 611
帖子: 60
在线: 3.8小时
虫号: 309550
注册: 2006-12-23
专业: 临床检验新技术

★
zgmmyp(金币+1):谢谢参与

可有以下方法：
1.冻融法：将材料置低温冰箱，结冰以后在提高温度融化，反复作几次，可以破坏细胞膜，前提是你的提取蛋白要禁得起温度考验。
2.超声匀浆，使用冰水介质，防止温度过高，这个比较常用，特别是处理的样本量比较少时。
3.匀浆机，有研磨式和内切式，我更青睐内切式，不同的刀头可以处理不同量的样本。不要持续匀浆时间过长，防止温度升高，也可以和第一中方法结合使用，即冰冻以后进行匀浆处理，效果更佳，但必须专门购置设备，性能好点的价格不菲。

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2楼2008-12-10 16:22:06

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