24小时热门版块排行榜    

查看: 993  |  回复: 7
当前主题已经存档。

zgmmyp

金虫 (小有名气)

[交流] 组织匀浆!!!!弱弱的问题!但是很急!谢谢各位大侠!

组织匀浆!!!!弱弱的问题!但是很急!谢谢各位大侠!
我要研究鱼类肝脏组织内的蛋白质,是一种在肝脏内合成然后分泌到血液中的蛋白质。我想取肝脏制成匀浆,跑SDS-PAGE观察。这种蛋白对热比较敏感。在这里想请教各位大侠,我用什么匀浆方法比较好?用PMSF做蛋白酶抑制剂可以吗?制备匀浆的时候用什么匀浆缓冲液比较好?
  谢谢各位!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winfly

金虫 (小有名气)


zgmmyp(金币+1):谢谢参与
可有以下方法:
1.冻融法:将材料置低温冰箱,结冰以后在提高温度融化,反复作几次,可以破坏细胞膜,前提是你的提取蛋白要禁得起温度考验。
2.超声匀浆,使用冰水介质,防止温度过高,这个比较常用,特别是处理的样本量比较少时。
3.匀浆机,有研磨式和内切式,我更青睐内切式,不同的刀头可以处理不同量的样本。不要持续匀浆时间过长,防止温度升高,也可以和第一中方法结合使用,即冰冻以后进行匀浆处理,效果更佳,但必须专门购置设备,性能好点的价格不菲。
2楼2008-12-10 16:22:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgmmyp

金虫 (小有名气)

谢谢winfly的回复!
看来只能用超声了! 谢谢
3楼2008-12-11 10:10:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


zgmmyp(金币+1):谢谢参与
用液氮研磨,这是最常用的方法,而且也非常彻底,同时还能防止蛋白降解
要用超声,就必需保证容器与冰水重复接触防止局部升温太高
PMSF可以用,要新制的,因为PMSF在水相中的半衰期很短(以分钟计的……忘了多少,似乎30min)
4楼2008-12-11 10:21:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhijiangli

金虫 (正式写手)


zgmmyp(金币+1):谢谢参与
没有做过动物的

只做过植物 用的是液氮

祝楼主 实验顺利
缘分这东西O(∩_∩)O~
5楼2008-12-11 16:26:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲


zgmmyp(金币+1):谢谢参与
可以考虑用液氮。比较放心
6楼2008-12-11 17:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuixinshi

银虫 (小有名气)


zgmmyp(金币+1):谢谢参与
楼上说的都很好啊  但是我觉得液氮反复冻融会不会大量破坏蛋白
7楼2008-12-12 13:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgmmyp

金虫 (小有名气)

谢谢 各位!
  用液氮的话太麻烦了  因为我的样品数量太多了 !有48个!那样的话我一天液研不完.我以前用的是超声!发现就是比较容易产生热,对蛋白很不好!这次是不做的试验,所以想求助大家,找个好的匀浆方法!

谢谢各位!这次再试一下看看吧。。。
祝福各位达人!!
8楼2008-12-14 10:31:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zgmmyp 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +9 基诺咪客 2026-08-17 12/600 2026-08-19 09:49 by niuniu-1234
[基金申请] 今天放榜吗? +9 布布和一二 2026-08-19 9/450 2026-08-19 09:33 by zqycae
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 朋友圈看到的 +5 wangzilk 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:05 by luw152
[基金申请] 不应该看fileCode +8 且听虎啸 2026-08-12 10/500 2026-08-19 08:03 by luw152
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +4 Tide man 2026-08-12 5/250 2026-08-19 07:41 by 201120518022
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
请填处理意见