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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 组织匀浆！！！！弱弱的问题！但是很急！谢谢各位大侠！
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zgmmyp

金虫 (小有名气)

[交流] 组织匀浆！！！！弱弱的问题！但是很急！谢谢各位大侠！

组织匀浆！！！！弱弱的问题！但是很急！谢谢各位大侠！
我要研究鱼类肝脏组织内的蛋白质，是一种在肝脏内合成然后分泌到血液中的蛋白质。我想取肝脏制成匀浆，跑SDS-PAGE观察。这种蛋白对热比较敏感。在这里想请教各位大侠，我用什么匀浆方法比较好？用PMSF做蛋白酶抑制剂可以吗？制备匀浆的时候用什么匀浆缓冲液比较好？
  谢谢各位！！
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1楼 2008-12-10 14:22:10
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winfly

金虫 (小有名气)
★
zgmmyp(金币+1):谢谢参与
可有以下方法：
1.冻融法：将材料置低温冰箱，结冰以后在提高温度融化，反复作几次，可以破坏细胞膜，前提是你的提取蛋白要禁得起温度考验。
2.超声匀浆，使用冰水介质，防止温度过高，这个比较常用，特别是处理的样本量比较少时。
3.匀浆机，有研磨式和内切式，我更青睐内切式，不同的刀头可以处理不同量的样本。不要持续匀浆时间过长，防止温度升高，也可以和第一中方法结合使用，即冰冻以后进行匀浆处理，效果更佳，但必须专门购置设备，性能好点的价格不菲。
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2楼2008-12-10 16:22:06
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zgmmyp

金虫 (小有名气)
谢谢winfly的回复！
看来只能用超声了！ 谢谢
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3楼2008-12-11 10:10:55
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
zgmmyp(金币+1):谢谢参与
用液氮研磨，这是最常用的方法，而且也非常彻底，同时还能防止蛋白降解
要用超声，就必需保证容器与冰水重复接触防止局部升温太高
PMSF可以用，要新制的，因为PMSF在水相中的半衰期很短（以分钟计的……忘了多少，似乎30min）
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4楼2008-12-11 10:21:07
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zhijiangli

金虫 (正式写手)
★
zgmmyp(金币+1):谢谢参与
没有做过动物的

只做过植物 用的是液氮

祝楼主 实验顺利
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缘分这东西O(∩_∩)O~
5楼2008-12-11 16:26:44
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
★
zgmmyp(金币+1):谢谢参与
可以考虑用液氮。比较放心
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6楼2008-12-11 17:05:29
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shuixinshi

银虫 (小有名气)
★
zgmmyp(金币+1):谢谢参与
楼上说的都很好啊  但是我觉得液氮反复冻融会不会大量破坏蛋白
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7楼2008-12-12 13:54:56
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zgmmyp

金虫 (小有名气)
谢谢 各位！
  用液氮的话太麻烦了  因为我的样品数量太多了 ！有48个！那样的话我一天液研不完.我以前用的是超声！发现就是比较容易产生热，对蛋白很不好！这次是不做的试验，所以想求助大家，找个好的匀浆方法！

谢谢各位！这次再试一下看看吧。。。
祝福各位达人！！
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8楼2008-12-14 10:31:11
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