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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zgmmyp

金虫 (小有名气)

[交流] 组织匀浆!!!!弱弱的问题!但是很急!谢谢各位大侠!

组织匀浆!!!!弱弱的问题!但是很急!谢谢各位大侠!
我要研究鱼类肝脏组织内的蛋白质,是一种在肝脏内合成然后分泌到血液中的蛋白质。我想取肝脏制成匀浆,跑SDS-PAGE观察。这种蛋白对热比较敏感。在这里想请教各位大侠,我用什么匀浆方法比较好?用PMSF做蛋白酶抑制剂可以吗?制备匀浆的时候用什么匀浆缓冲液比较好?
  谢谢各位!!
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winfly

金虫 (小有名气)


zgmmyp(金币+1):谢谢参与
可有以下方法:
1.冻融法:将材料置低温冰箱,结冰以后在提高温度融化,反复作几次,可以破坏细胞膜,前提是你的提取蛋白要禁得起温度考验。
2.超声匀浆,使用冰水介质,防止温度过高,这个比较常用,特别是处理的样本量比较少时。
3.匀浆机,有研磨式和内切式,我更青睐内切式,不同的刀头可以处理不同量的样本。不要持续匀浆时间过长,防止温度升高,也可以和第一中方法结合使用,即冰冻以后进行匀浆处理,效果更佳,但必须专门购置设备,性能好点的价格不菲。
2楼2008-12-10 16:22:06
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zgmmyp

金虫 (小有名气)

谢谢winfly的回复!
看来只能用超声了! 谢谢
3楼2008-12-11 10:10:55
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


zgmmyp(金币+1):谢谢参与
用液氮研磨,这是最常用的方法,而且也非常彻底,同时还能防止蛋白降解
要用超声,就必需保证容器与冰水重复接触防止局部升温太高
PMSF可以用,要新制的,因为PMSF在水相中的半衰期很短(以分钟计的……忘了多少,似乎30min)
4楼2008-12-11 10:21:07
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zhijiangli

金虫 (正式写手)


zgmmyp(金币+1):谢谢参与
没有做过动物的

只做过植物 用的是液氮

祝楼主 实验顺利
缘分这东西O(∩_∩)O~
5楼2008-12-11 16:26:44
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲


zgmmyp(金币+1):谢谢参与
可以考虑用液氮。比较放心
6楼2008-12-11 17:05:29
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shuixinshi

银虫 (小有名气)


zgmmyp(金币+1):谢谢参与
楼上说的都很好啊  但是我觉得液氮反复冻融会不会大量破坏蛋白
7楼2008-12-12 13:54:56
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zgmmyp

金虫 (小有名气)

谢谢 各位!
  用液氮的话太麻烦了  因为我的样品数量太多了 !有48个!那样的话我一天液研不完.我以前用的是超声!发现就是比较容易产生热,对蛋白很不好!这次是不做的试验,所以想求助大家,找个好的匀浆方法!

谢谢各位!这次再试一下看看吧。。。
祝福各位达人!!
8楼2008-12-14 10:31:11
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