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那些花儿243铜虫 (初入文坛)
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蛋白跑SDS-PAGE形成二聚体、三聚体、四聚体等等这样的ladder，是什么原因？已有1人参与
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我实验中遇到了一点现象，请各位大神指点。 我的蛋白与无机纳米颗粒作用后，跑SDS-PAGE，胶上显示蛋白不能完全裂开，而是呈现二聚体、三聚体、四聚体等等这样的ladder状态，如下图1所示（图中最下面一条是单体，约50 kDa）。想试图解释形成ladder的机理是什么，目前猜测，是纳米颗粒促进了蛋白之间形成了某种共价或非共价作用，如果是共价作用有没有什么办法把蛋白序列中具体的作用位点解析出来。 我已经做了一点尝试： 1. 把蛋白用含高浓度DTT的buffer处理，ladder的含量无明显变化，如下图所示。 2. 把SDS-PAGE胶中的二聚体、三聚体分别切下，溶出蛋白，loading buffer处理，再次跑SDS-PAGE，发现，二聚体可以断裂成二聚体和单体，三聚体可以断裂成三聚体、二聚体和单体。溶出蛋白，分别用含（+）或不含（-）DTT的loading buffer处理，发现都有部分多聚体裂开，但+DTT裂开的程度更大，如下图所示。 3. 把蛋白用IAM+DTT处理后（IAM修饰巯基，防止被DTT打开的巯基再次形成二硫键），再用loading buffer处理，再跑SDS-PAGE，仍然呈现ladder状（不过不确定IAM的修饰是否有效，据说IAM的修饰非常容易）。  FIG4.jpg |
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那些花儿243: 金币+20, ★★★很有帮助 2017-03-23 16:08:25
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6楼2016-12-27 02:43:53
那些花儿243
铜虫 (初入文坛)
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- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2016-12-23 15:05:07
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3楼2016-12-25 01:53:37
4楼2016-12-25 13:03:40