| 查看: 1248 | 回复: 6 | ||
[求助]
跪求大神啊！——减少模板量之后染色体步移没条带了
|
|
本科生做毕设第一次PCR就是染色体步移啊，求大神赐教。 用的是Takara家的geneme walking，寻找对虾p53基因启动子。 前期设计了三个引物，第一次提了虾卵基因组DNA，模板浓度是93.93ng/ul. 看说明书第一次跑要0.1~1ug所以加了8ul模板，跑的25ul体系，退火温度56°C （说明书上是60°以上但试过了一点条带没有，引物本身Tm不高，所以就定为56°C） 然后这是第一次跑的结果（marker2K+，最亮的750）：依次AP2，AP3，AP4，maker ![\"跪求大神啊！——减少模板量之后染色体步移没条带了\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2016/1222/w68h4918085_1482390638_265.jpg#opennewwindow\") P.S. 有大神知道为什么点样孔这么亮吗？ 一开始AP4挺亮的很开心，然后每次都基本不变条件，结果AP4第三次就是这样：  跟老师说了以后老师说模板量太多，只用1ul就好。我又重提了一次DNA，浓度有124ng/ul，我又用2ulAP4跑了第一次（其他条件不变）：  这下一点条带都没有了啊！求大神指教，我接下来该怎么办？ 是继续做第二次？还是改一下条件，温度模板量啥的，我看网上说模板至少3ug是吗？还是因为我引物设计有问题？模板260/280是1.8几，260/230是4。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有97人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
![\"跪求大神啊！——减少模板量之后染色体步移没条带了-3\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2016/1222/w68h4918085_1482391822_824.jpg#opennewwindow\")
2楼2016-12-22 15:30:57
3楼2016-12-22 15:32:23
4楼2016-12-22 16:18:21
5楼2016-12-22 20:12:15
6楼2016-12-22 23:45:14
7楼2016-12-22 23:49:21