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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么p 不出来？
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Mr.Peter

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么p 不出来？ 已有5人参与

这是两对引物，用LA 酶，taq 酶都不行，给点建议，帮忙帮忙

为什么p 不出来？


为什么p 不出来？-1


为什么p 不出来？-2


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1楼 2016-12-21 10:30:30
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Alice 2016

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果模板是cDNA的话，你看看你逆转的时候加的是什么引物，建议不要加随机引物，因为可能导致最后得到的目的片段不完整。我之前买了诺唯赞的逆转录盒子，用了随机引物，一直没有条带，后来换成oligo dT逆转 就有结果了。还有我觉得上样量不少，因为逆转产物为混合物，可能含有抑制物，所以不建议多加。
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怕什么真理无穷，进一寸有一寸的欢喜
18楼2016-12-22 09:17:39
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往生花

至尊木虫 (文坛精英)
降低退火温度试试，楼主应该给出目标片段的大小才对

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生而必争朝夕，活而必尽善美
2楼2016-12-21 10:40:58
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天明鑫8

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Mr.Peter: 金币+2, ★有帮助 2016-12-21 22:38:19
应该是引物设计不合理，看你ugs(Tm)的值偏差有点大，一般最好控制在60摄氏度左右，建议使用Primer3来设计引物；另外，第二个引物的延伸时间适当增长点，增长到3min;
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2016-12-21 10:44:29
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Mr.Peter

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 往生花 at 2016-12-21 10:40:58
降低退火温度试试，楼主应该给出目标片段的大小才对

是以cDNA 为模板，

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4楼2016-12-21 11:21:00
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