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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么p 不出来？
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Mr.Peter

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么p 不出来？ 已有5人参与

这是两对引物，用LA 酶，taq 酶都不行，给点建议，帮忙帮忙

为什么p 不出来？


为什么p 不出来？-1


为什么p 不出来？-2


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1楼 2016-12-21 10:30:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wangxue77

禁虫 (初入文坛)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-12-22 07:40:00
本帖内容被屏蔽
7楼2016-12-21 14:15:57
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天明鑫8

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Mr.Peter: 金币+2, ★有帮助 2016-12-21 22:38:19
应该是引物设计不合理，看你ugs(Tm)的值偏差有点大，一般最好控制在60摄氏度左右，建议使用Primer3来设计引物；另外，第二个引物的延伸时间适当增长点，增长到3min;
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3楼2016-12-21 10:44:29
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Mr.Peter: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-12-21 15:38:20
用cDNA的话可以把模板多加点，我们刚开始的时候也是扩不出来，后来加了4u的模板才有的。还有退火温度建议设置一个梯度，找到最适合的退火温度。预变性时间可以长一点，我们一般是5-10min

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
9楼2016-12-21 15:14:34
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往生花

至尊木虫 (文坛精英)
降低退火温度试试，楼主应该给出目标片段的大小才对

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生而必争朝夕，活而必尽善美
2楼2016-12-21 10:40:58
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wenwanhong

新虫 (初入文坛)
用primerstar聚合酶很好p

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11楼2016-12-21 16:18:07
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Mr.Peter

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 往生花 at 2016-12-21 10:40:58
降低退火温度试试，楼主应该给出目标片段的大小才对

是以cDNA 为模板，

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4楼2016-12-21 11:21:00
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Mr.Peter

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 往生花 at 2016-12-21 10:40:58
降低退火温度试试，楼主应该给出目标片段的大小才对

目标片段我问问老师，

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5楼2016-12-21 11:23:59
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Mr.Peter

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 往生花 at 2016-12-21 10:40:58
降低退火温度试试，楼主应该给出目标片段的大小才对

一个2144bp 一个快3000

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6楼2016-12-21 11:34:47
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wangxue77

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
8楼2016-12-21 14:18:54
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Mr.Peter

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-21 15:14:34
用cDNA的话可以把模板多加点，我们刚开始的时候也是扩不出来，后来加了4u的模板才有的。还有退火温度建议设置一个梯度，找到最适合的退火温度。预变性时间可以长一点，我们一般是5-10min
...

谢谢啦

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10楼2016-12-21 15:27:20
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