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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Mr.Peter

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么p 不出来? 已有5人参与

这是两对引物,用LA 酶,taq 酶都不行,给点建议,帮忙帮忙

为什么p 不出来?


为什么p 不出来?-1


为什么p 不出来?-2


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wangxue77

禁虫 (初入文坛)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-12-22 07:40:00
本帖内容被屏蔽

7楼2016-12-21 14:15:57
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天明鑫8

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Mr.Peter: 金币+2, 有帮助 2016-12-21 22:38:19
应该是引物设计不合理,看你ugs(Tm)的值偏差有点大,一般最好控制在60摄氏度左右,建议使用Primer3来设计引物;另外,第二个引物的延伸时间适当增长点,增长到3min;
3楼2016-12-21 10:44:29
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Mr.Peter: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-12-21 15:38:20
用cDNA的话可以把模板多加点,我们刚开始的时候也是扩不出来,后来加了4u的模板才有的。还有退火温度建议设置一个梯度,找到最适合的退火温度。预变性时间可以长一点,我们一般是5-10min

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
9楼2016-12-21 15:14:34
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往生花

至尊木虫 (文坛精英)

降低退火温度试试,楼主应该给出目标片段的大小才对

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生而必争朝夕,活而必尽善美
2楼2016-12-21 10:40:58
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wenwanhong

新虫 (初入文坛)

11楼2016-12-21 16:18:07
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普通回帖

Mr.Peter

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 往生花 at 2016-12-21 10:40:58
降低退火温度试试,楼主应该给出目标片段的大小才对

是以cDNA 为模板,

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4楼2016-12-21 11:21:00
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Mr.Peter

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 往生花 at 2016-12-21 10:40:58
降低退火温度试试,楼主应该给出目标片段的大小才对

目标片段我问问老师,

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5楼2016-12-21 11:23:59
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Mr.Peter

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 往生花 at 2016-12-21 10:40:58
降低退火温度试试,楼主应该给出目标片段的大小才对

一个2144bp 一个快3000

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6楼2016-12-21 11:34:47
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wangxue77

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

8楼2016-12-21 14:18:54
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Mr.Peter

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-21 15:14:34
用cDNA的话可以把模板多加点,我们刚开始的时候也是扩不出来,后来加了4u的模板才有的。还有退火温度建议设置一个梯度,找到最适合的退火温度。预变性时间可以长一点,我们一般是5-10min
...

谢谢啦

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10楼2016-12-21 15:27:20
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