| 查看: 3838 | 回复: 105 | |||
[交流]
PCR 在不同个体中扩增效率不一致
|
|||
|
请教关于PCR扩增效率问题，如图，左1-9是不同个体，左10是不加DNA的对照，左11是marker。左7在目标位置稍有痕迹，左9没有目的条带。目标长度分别为80bp,160bp。 引物是半巢式引物，左右个一条引物，中间的引物和左端的引物预期也可以扩增出条带，所以可以看到两条比较明显的带。 用的酶是Platinum SuperFi Green PCR Master Mix, 体系为：mix: 5ul, F1：1ul, R1: 1ul，R2:1ul，终浓度均为0.5uM DNA:1ul 超纯水补足10ul 加样过程是先把出DNA外的mix，引物混好，离心分装后加DNA。 扩增程序是按照说明书来的，应该问题不大，caculated和block模型都用了，两种程序对两条带的浓度有点影响，但都是有的个体扩得出来，有的扩不出来，图示用的是block模型。 模版也测过浓度，大致都一样，A260/280比2.0稍高，不超过0.1。这里放的只是10个样品的带，还扩了其他个体，不管DNA浓度和A260/280怎么变，都有扩出来的，也有扩不出来的，大概有3/4的个体可以明显地扩出预期的两条带。我一般会把不同的管按横向一字排开，奇怪的是，扩不出来的基本都是边上的个体。 现在有三点怀疑：1、PCR仪受热不均匀，但是网上搜了很多也没搜到这样的问题，实验室没有别的PCR仪，又不方便去其他实验室做；2、样品本身引物不同品种之间有差别；3、引物和DNA均是用TE溶解，可能会对扩增有影响。希望各位提提建议，谢谢！  Labuser 2016-12-17 12_11.8_block method_30min.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有127人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 同一个昆虫个体中得到不同的CDNA序列，为什么？
已经有4人回复
- Nature ： DNA甲基化最新研究及常用研究方法
已经有43人回复
- 2010中科院微生物考博真题答案
已经有39人回复
- ISSR分子标记中用Popgene计算相关参数时样本量的问题
已经有16人回复
- 肠子里的生物能活多少年？
已经有6人回复
- 动植物样品的采集及DNA样品的提取(ZT)
已经有10人回复
- 电泳筛选SSR引物时，只跑出了一条带，这样正常吗？是不是说明SSR引物没有多态性？
已经有3人回复
- 电泳筛选SSR引物时，只跑出了一条带，这样正常吗？是不是说明SSR引物没有多态性啊？
已经有1人回复
- 一种确定端粒长度的简便方法----ebiotrade
已经有5人回复
- 【分享】荧光定量PCR简介
已经有13人回复
- 【原创】硕士博士期间的收获
已经有8人回复
- 浙江大学2006年分子生物学考博
已经有8人回复
8楼2016-12-19 12:35:46
27楼2016-12-19 13:22:37
简单回复
frankfh2楼
2016-12-19 12:10
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
2016-12-19 12:22
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
2016-12-19 12:23
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福
2016-12-19 12:25
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
最爱喝兽奶6楼
2016-12-19 12:26
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫IOS客户端
2016-12-19 12:35
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
2016-12-19 12:42
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
tan91410楼
2016-12-19 12:44
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
zhenwuhuang11楼
2016-12-19 12:48
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
jaylong212楼
2016-12-19 12:49
回复
慕雪丫头13楼
2016-12-19 12:50
回复
ccwmxm14楼
2016-12-19 12:52
回复
dsctg15楼
2016-12-19 12:55
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
yaoyao14516楼
2016-12-19 12:56
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
y 发自小木虫IOS客户端
吸血人狼城17楼
2016-12-19 12:56
回复
longwave18楼
2016-12-19 12:57
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
清愁幽冰19楼
2016-12-19 12:57
回复
yexuqing20楼
2016-12-19 12:59
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
bush28621楼
2016-12-19 12:59
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
ajingne122楼
2016-12-19 13:02
回复
wdxmu23楼
2016-12-19 13:05
回复
f4189824楼
2016-12-19 13:05
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
好 发自小木虫Android客户端
gorgan25楼
2016-12-19 13:10
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
175297181126楼
2016-12-19 13:19
回复
YoungHjy28楼
2016-12-19 13:24
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
！ 发自小木虫Android客户端
wtbccq50529楼
2016-12-19 13:25
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
ellen_rock30楼
2016-12-19 13:33
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
!
在南极看极光31楼
2016-12-19 13:47
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
纳米材料75332楼
2016-12-19 13:49
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
莲花如梦33楼
2016-12-19 13:51
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
唱不完一首歌34楼
2016-12-19 13:58
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
gg
bj200898935楼
2016-12-19 14:00
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
多啦A梦283336楼
2016-12-19 14:02
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
sz_kebaoyuan37楼
2016-12-19 14:08
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
343538楼
2016-12-19 14:13
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
只用一颗真心39楼
2016-12-19 14:14
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
chejiacun40楼
2016-12-19 14:17
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
包子home41楼
2016-12-19 14:22
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
三八洲42楼
2016-12-19 14:24
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
多啦C梦060143楼
2016-12-19 14:25
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
tzynew44楼
2016-12-19 14:27
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
tableman45楼
2016-12-19 14:28
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福了。
神蛊温皇46楼
2016-12-19 14:35
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
吃我化骨绵掌47楼
2016-12-19 14:35
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
ff
低价核磁48楼
2016-12-19 14:38
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
yuzhichao49楼
2016-12-19 14:42
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福
简单点简单点50楼
2016-12-19 14:42
回复
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
ff
投票: