应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR 在不同个体中扩增效率不一致
1061/3返回列表123下一页
查看: 3553  |  回复: 105
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dblydxgl

金虫 (小有名气)

[交流] PCR 在不同个体中扩增效率不一致

请教关于PCR扩增效率问题，如图，左1-9是不同个体，左10是不加DNA的对照，左11是marker。左7在目标位置稍有痕迹，左9没有目的条带。目标长度分别为80bp,160bp。
        引物是半巢式引物，左右个一条引物，中间的引物和左端的引物预期也可以扩增出条带，所以可以看到两条比较明显的带。
        用的酶是Platinum SuperFi Green PCR Master Mix,
        体系为：mix: 5ul,
                      F1：1ul, R1: 1ul，R2:1ul，终浓度均为0.5uM
                      DNA:1ul
                      超纯水补足10ul
         加样过程是先把出DNA外的mix，引物混好，离心分装后加DNA。
        扩增程序是按照说明书来的，应该问题不大，caculated和block模型都用了，两种程序对两条带的浓度有点影响，但都是有的个体扩得出来，有的扩不出来，图示用的是block模型。
       模版也测过浓度，大致都一样，A260/280比2.0稍高，不超过0.1。这里放的只是10个样品的带，还扩了其他个体，不管DNA浓度和A260/280怎么变，都有扩出来的，也有扩不出来的，大概有3/4的个体可以明显地扩出预期的两条带。我一般会把不同的管按横向一字排开，奇怪的是，扩不出来的基本都是边上的个体。
       现在有三点怀疑：1、PCR仪受热不均匀，但是网上搜了很多也没搜到这样的问题，实验室没有别的PCR仪，又不方便去其他实验室做；2、样品本身引物不同品种之间有差别；3、引物和DNA均是用TE溶解，可能会对扩增有影响。希望各位提提建议，谢谢！

PCR 在不同个体中扩增效率不一致
Labuser 2016-12-17 12_11.8_block method_30min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2016-12-19 12:01:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

psylhh

木虫之王 (文学泰斗)
★
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
帮顶
回复此楼
8楼2016-12-19 12:35:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

假大空

木虫之王 (文学泰斗)
★
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
顶顶顶
回复此楼
27楼2016-12-19 13:22:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
frankfh2楼
2016-12-19 12:10   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
slytjiaofei3楼
2016-12-19 12:22   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
gengxin604楼
2016-12-19 12:23   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福
numerical5楼
2016-12-19 12:25   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
最爱喝兽奶6楼
2016-12-19 12:26   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫IOS客户端
shenrenren7楼
2016-12-19 12:35   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
hongyingwu9楼
2016-12-19 12:42   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
tan91410楼
2016-12-19 12:44   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
zhenwuhuang11楼
2016-12-19 12:48   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
jaylong212楼
2016-12-19 12:49   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
慕雪丫头13楼
2016-12-19 12:50   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
ccwmxm14楼
2016-12-19 12:52   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
dsctg15楼
2016-12-19 12:55   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
yaoyao14516楼
2016-12-19 12:56   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
y 发自小木虫IOS客户端
吸血人狼城17楼
2016-12-19 12:56   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
longwave18楼
2016-12-19 12:57   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
清愁幽冰19楼
2016-12-19 12:57   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
yexuqing20楼
2016-12-19 12:59   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
bush28621楼
2016-12-19 12:59   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
ajingne122楼
2016-12-19 13:02   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
wdxmu23楼
2016-12-19 13:05   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫IOS客户端
f4189824楼
2016-12-19 13:05   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
好 发自小木虫Android客户端
gorgan25楼
2016-12-19 13:10   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
175297181126楼
2016-12-19 13:19   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
YoungHjy28楼
2016-12-19 13:24   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
！ 发自小木虫Android客户端
wtbccq50529楼
2016-12-19 13:25   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
ellen_rock30楼
2016-12-19 13:33   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
!
在南极看极光31楼
2016-12-19 13:47   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
纳米材料75332楼
2016-12-19 13:49   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
莲花如梦33楼
2016-12-19 13:51   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
唱不完一首歌34楼
2016-12-19 13:58   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
gg
bj200898935楼
2016-12-19 14:00   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
多啦A梦283336楼
2016-12-19 14:02   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
sz_kebaoyuan37楼
2016-12-19 14:08   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
343538楼
2016-12-19 14:13   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
只用一颗真心39楼
2016-12-19 14:14   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
chejiacun40楼
2016-12-19 14:17   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
包子home41楼
2016-12-19 14:22   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
三八洲42楼
2016-12-19 14:24   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
多啦C梦060143楼
2016-12-19 14:25   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
tzynew44楼
2016-12-19 14:27   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
tableman45楼
2016-12-19 14:28   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福了。
神蛊温皇46楼
2016-12-19 14:35   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
吃我化骨绵掌47楼
2016-12-19 14:35   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
ff
低价核磁48楼
2016-12-19 14:38   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
yuzhichao49楼
2016-12-19 14:42   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
祝福
简单点简单点50楼
2016-12-19 14:42   回复  
dblydxgl(金币+1): 谢谢参与
ff
相关版块跳转 我要订阅楼主 dblydxgl 的主题更新
1061/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭