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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 高分子 » 功能高分子 » BSA蛋白吸附紫外测定方法就指教。
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110370210

铜虫 (著名写手)

[求助] BSA蛋白吸附紫外测定方法就指教。 已有2人参与

我想验证合成的高分子具有抗蛋白吸附作用，将BSA2mg/ml加到我的高分子溶液里，作用一段时间，离心出去沉淀，然后上清液测紫外。为什么有高分子的蛋白紫外吸收反而比单纯同浓度的BSA吸收还要高？不知道是离心的问题还是BSA问题。我测得是278nm的吸收。请问有人做过此实验吗？急求帮助。
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1楼 2016-12-15 19:44:48
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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110370210: 金币+2 2016-12-16 08:40:28
你看看你用的高分子是不是有共轭基团，有比肽键更强的紫外吸收

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2楼2016-12-15 23:58:18
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110370210

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2016-12-15 23:58:18
你看看你用的高分子是不是有共轭基团，有比肽键更强的紫外吸收

浓度大的时候我测紫外确实有吸收峰，所以我把高分子浓度降到尽可能低，尽量让所以高分子都随BSA沉淀下去，这样测的时候紫外看不到我高分子吸收峰。不知道这样想对不对？还有BSA在PBS7.4,1mg/mL的吸光度在0.64左右，我看有的说应该在1。所以不知道是我BSA出问题了，还是其他操作的原因
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3楼2016-12-16 08:38:15
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110370210

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2016-12-15 23:58:18
你看看你用的高分子是不是有共轭基团，有比肽键更强的紫外吸收

肽键吸收在230吧应该？那如果用考马斯亮蓝测590吸收是否可以避免呢？或者请问您有别的更好的办法吗？
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4楼2016-12-16 08:40:12
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 110370210 at 2016-12-16 08:40:12
肽键吸收在230吧应该？那如果用考马斯亮蓝测590吸收是否可以避免呢？或者请问您有别的更好的办法吗？...

肽键吸收应该在268吧，我不确定要查查看

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5楼2016-12-16 08:59:16
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 110370210 at 2016-12-16 08:38:15
浓度大的时候我测紫外确实有吸收峰，所以我把高分子浓度降到尽可能低，尽量让所以高分子都随BSA沉淀下去，这样测的时候紫外看不到我高分子吸收峰。不知道这样想对不对？还有BSA在PBS7.4,1mg/mL的吸光度在0.64左右， ...

我不太明白你的实验设计，一般都是证有，你这个是证无。假设高分子对蛋白吸收有促进作用，应该是高分子本身在这个波长无吸收，蛋白有吸收，加入高分子之后，蛋白吸收信号变强了。如果是证无，原来蛋白有吸收，加入无吸收的高分子，蛋白紫外信号变弱了才对。我总觉得你的实验设计有点问题，为什么把蛋白往高分子里面加？

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6楼2016-12-16 09:03:18
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110370210

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2016-12-16 09:03:18
我不太明白你的实验设计，一般都是证有，你这个是证无。假设高分子对蛋白吸收有促进作用，应该是高分子本身在这个波长无吸收，蛋白有吸收，加入高分子之后，蛋白吸收信号变强了。如果是证无，原来蛋白有吸收，加入 ...

不好意思，是我没说清楚。我的高分子含有PEG，想证明PEG抵抗蛋白吸附作用。将蛋白加到高分子溶液里，然后粒子，除去生成的高分子-BSA沉淀，然后测上清液紫外，吸光度越大说明我高分子抗吸附越好。另外作对照，一个不加PEG的高分子，还有一个单纯BSA的。现在问题是，我加上高分子后吸光度比单纯BSA还高，这就不合理了。
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7楼2016-12-16 09:43:50
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 110370210 at 2016-12-16 09:43:50
不好意思，是我没说清楚。我的高分子含有PEG，想证明PEG抵抗蛋白吸附作用。将蛋白加到高分子溶液里，然后粒子，除去生成的高分子-BSA沉淀，然后测上清液紫外，吸光度越大说明我高分子抗吸附越好。另外作对照，一个 ...

我确定PEG是没有紫外吸收的，你的高分子有没有不清楚，建议你从这方面考虑。也有可能你的PEG接枝率不够，没有达到你想要的效果

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8楼2016-12-16 12:51:20
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110370210

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2016-12-16 12:51:20
我确定PEG是没有紫外吸收的，你的高分子有没有不清楚，建议你从这方面考虑。也有可能你的PEG接枝率不够，没有达到你想要的效果
...

请问你测BSA浓度是怎么混匀的呢？我刚看到说不能剧烈震荡什么的，可能我操作没考虑这方面，也造成实验结果不理想。有没有什么好方法可以减少泡沫，又能混匀呢？
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9楼2016-12-16 14:00:00
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zwhua0502

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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你可以试试荧光法

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10楼2016-12-16 14:12:34
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