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ghx2005

铜虫 (初入文坛)

[交流] 求助:PCR扩增2000bp条带

目的基因比较长,不好扩增。试了几次都没有目的条带,做了bata-action有阳性结果,证明模板没问题。后来做了touch down PCR,隐约有目的条带,胶回收后以它为模版再做PCR,退火55度,还是没有目的条带。
怎么办?
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ningluztt

铜虫 (小有名气)

确定你的目的基因的GC 含量,GC含量高的话扩增就很困难,
3楼2008-12-08 17:25:34
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


ghx2005(金币+1):谢谢参与
用好一点点酶,保证能做出来
很多时候是酶的扩增能力的问题而不是PCR体系的问题
2楼2008-12-08 16:01:55
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synhily

木虫 (正式写手)

是啊 把你要扩的基因序列及引物发上来 帮你看看引物设计的咋样
4楼2008-12-08 18:32:57
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panghuili

金虫 (小有名气)

换酶 GC含量高的片段 用专门的酶
5楼2008-12-08 20:41:32
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