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ghx2005

铜虫 (初入文坛)

[交流] 求助:PCR扩增2000bp条带

目的基因比较长,不好扩增。试了几次都没有目的条带,做了bata-action有阳性结果,证明模板没问题。后来做了touch down PCR,隐约有目的条带,胶回收后以它为模版再做PCR,退火55度,还是没有目的条带。
怎么办?
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★
ghx2005(金币+1):谢谢参与
用好一点点酶,保证能做出来
很多时候是酶的扩增能力的问题而不是PCR体系的问题
2楼2008-12-08 16:01:55
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ningluztt

铜虫 (小有名气)

确定你的目的基因的GC 含量,GC含量高的话扩增就很困难,
3楼2008-12-08 17:25:34
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synhily

木虫 (正式写手)

是啊 把你要扩的基因序列及引物发上来 帮你看看引物设计的咋样
4楼2008-12-08 18:32:57
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panghuili

金虫 (小有名气)

换酶 GC含量高的片段 用专门的酶
5楼2008-12-08 20:41:32
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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)

★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
适当降低退火温度,适当延长延伸时间。还有要注意你的所有东西不要反复冻融。祝好运!
霉菌
6楼2008-12-08 21:40:24
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lipishun

金虫 (小有名气)

Takara的 LA,做RT-PCR?
建议用Invitrogen的反转试剂盒!
7楼2008-12-08 21:40:50
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lipishun

金虫 (小有名气)

Takara的 LA,做RT-PCR?
建议用Invitrogen的反转试剂盒!
8楼2008-12-08 21:42:26
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