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奶茶袜子

新虫 (初入文坛)

[求助] crispr敲除原理 已有6人参与

我看了几篇文献,知道cas9会在我设计好的序列下游pam的5'端3个bp处形成DBS。我现在设计的sgRNA是target了蛋白A第一个外显子的20bp,那样就能保证蛋白A不表达了?那在没有抗体的情况下我要怎么验证敲除效果?

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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2016-12-13 10:46:27
第一个外显子敲除了,ATG也就没了,后面的翻译序列也就乱了,具体可以比较敲除前后序列的变化。
如果检验是否敲除,标准方法是Southern blot。

ATG不一定在第一个外显子上,要看cds从哪里开始的。验证的话,测序比较直接。
2019更好更棒!
9楼2018-02-08 17:21:37
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一个外显子敲除了,ATG也就没了,后面的翻译序列也就乱了,具体可以比较敲除前后序列的变化。
如果检验是否敲除,标准方法是Southern blot。
2楼2016-12-13 10:46:27
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不要只看外显子,要先在外显子里面找到编码这个基因的起始密码子ATG的位置,找到之后在ATG后面选择gRNA序列
3楼2016-12-13 14:32:30
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C小杨

新虫 (初入文坛)

以前做过在5’UTR和外显子双位点敲除,效果很好

发自小木虫Android客户端
4楼2016-12-13 14:44:37
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