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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » crispr敲除原理
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奶茶袜子

新虫 (初入文坛)

[求助] crispr敲除原理 已有6人参与

我看了几篇文献，知道cas9会在我设计好的序列下游pam的5'端3个bp处形成DBS。我现在设计的sgRNA是target了蛋白A第一个外显子的20bp，那样就能保证蛋白A不表达了？那在没有抗体的情况下我要怎么验证敲除效果？

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1楼 2016-12-12 12:07:27
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小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

crispr敲除原理
关注此贴，里面不定期讲一讲关于CRISPR机理方面的介绍
关于敲除效率验证，可以通过测序看看目的基因的敲除情况，以此判断目的基因是否被敲除
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5楼2016-12-19 10:23:28
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一个外显子敲除了，ATG也就没了，后面的翻译序列也就乱了，具体可以比较敲除前后序列的变化。
如果检验是否敲除，标准方法是Southern blot。
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2楼2016-12-13 10:46:27
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不要只看外显子，要先在外显子里面找到编码这个基因的起始密码子ATG的位置，找到之后在ATG后面选择gRNA序列
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3楼2016-12-13 14:32:30
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C小杨

新虫 (初入文坛)
以前做过在5’UTR和外显子双位点敲除，效果很好

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4楼2016-12-13 14:44:37
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