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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 筛选内参基因，荧光定量不太会做
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菜鸟茜茜

新虫 (初入文坛)

[求助] 筛选内参基因，荧光定量不太会做 已有1人参与

我现在在做内参基因的筛选，目前只选出6个，老师让我现在先做做看荧光定量，做一个处理。我想问下大家是怎么加样的呢，我是6个内参4个重复，还有基因的3个浓度，刚刚是72孔，我同学说最好做空白对照？我也不懂，我是大菜鸟啊，很多都不懂。老师还让我可以先做内参的特异性检测，不懂这个要怎么做，请问大家有知道的吗？有在做内参筛选的同学吗？万分感谢！

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1楼 2016-12-12 00:08:10
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qianxin44

新虫 (初入文坛)
特异性检测好像是看它的溶解曲线是不是单峰
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2楼2016-12-17 17:19:46
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zhaojieyumm

铜虫 (正式写手)
先做内参基因看看，加溶解曲线看看引物特异性好不好

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3楼2016-12-17 17:34:18
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likelich

木虫 (小有名气)
先验证引物的特异性 扩增效率 溶解曲线 没问题的话基本就是三个软件的事了

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4楼2016-12-17 18:20:05
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菜鸟茜茜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by likelich at 2016-12-17 18:20:05
先验证引物的特异性 扩增效率 溶解曲线 没问题的话基本就是三个软件的事了

验证引物是怎么加样啊？

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5楼2016-12-18 07:01:48
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p君少年

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

内容已删除
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6楼2016-12-28 14:35:02
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Orange16

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by p君少年 at 2016-12-28 14:35:02
引物特异性检测就是看溶解曲线是否为单峰。
     建议楼主可以先做个模板曲线，模板10倍梯度稀释，5个梯度，程序设置时选择做标准曲线，这样软件可以自动帮你算出扩增效率及R方，也能分析溶解曲线。
    另外第一 ...

请问你有没有用过RefFinder这个网站筛选内参基因？别人推荐这个软件，但是文献里边的链接都不能用，也搜不出来

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7楼2017-05-11 21:30:49
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