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菜鸟茜茜

新虫 (初入文坛)

[求助] 筛选内参基因,荧光定量不太会做 已有1人参与

我现在在做内参基因的筛选,目前只选出6个,老师让我现在先做做看荧光定量,做一个处理。我想问下大家是怎么加样的呢,我是6个内参4个重复,还有基因的3个浓度,刚刚是72孔,我同学说最好做空白对照?我也不懂,我是大菜鸟啊,很多都不懂。老师还让我可以先做内参的特异性检测,不懂这个要怎么做,请问大家有知道的吗?有在做内参筛选的同学吗?万分感谢!

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qianxin44

新虫 (初入文坛)

特异性检测好像是看它的溶解曲线是不是单峰
2楼2016-12-17 17:19:46
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zhaojieyumm

铜虫 (正式写手)

先做内参基因看看,加溶解曲线看看引物特异性好不好

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3楼2016-12-17 17:34:18
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likelich

木虫 (小有名气)

先验证引物的特异性 扩增效率 溶解曲线 没问题的话基本就是三个软件的事了

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4楼2016-12-17 18:20:05
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菜鸟茜茜

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by likelich at 2016-12-17 18:20:05
先验证引物的特异性 扩增效率 溶解曲线 没问题的话基本就是三个软件的事了

验证引物是怎么加样啊?

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5楼2016-12-18 07:01:48
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p君少年

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

内容已删除
6楼2016-12-28 14:35:02
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Orange16

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by p君少年 at 2016-12-28 14:35:02
引物特异性检测就是看溶解曲线是否为单峰。
     建议楼主可以先做个模板曲线,模板10倍梯度稀释,5个梯度,程序设置时选择做标准曲线,这样软件可以自动帮你算出扩增效率及R方,也能分析溶解曲线。
    另外第一 ...

请问你有没有用过RefFinder这个网站筛选内参基因?别人推荐这个软件,但是文献里边的链接都不能用,也搜不出来

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7楼2017-05-11 21:30:49
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