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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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可以吗

银虫 (小有名气)

[交流] T4连接后出现的问题,很奇怪

我将目的基因和表达载体双酶切回收后,用T4连接酶,16度连接过夜,连接体系是20微升的。
再转进JM109感受态,37度培养将近12小时。
结果发现培养皿上(含抗生素)长了一层密密麻麻的菌落,几乎连成一片,其中还有分散的、长得比较大的单克隆。
我觉得是我想要的菌落,就试着尽量挑了些,结果pcr有我的目的条带,也能双酶切到我的条带。
可我就是不明白为什么人会长出那么一层像雾一样的菌?这是怎么回事?请教明白的虫有友。谢谢了


[ Last edited by 可以吗 on 2008-12-7 at 20:23 ]
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可以吗

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by synhily at 2008-12-8 18:31:
请问楼主是平连还是粘连,连接条件是什么?详细说明一下,大家共同学习噻!

我的是粘末端连接,所以比较容易连接,在pcr机器上连接5小时左右,再4度放置数小时就可以,其实不是很严格的,有人在4度放置24小时直接转化也是没问题的。
13楼2008-12-13 16:13:56
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


恭喜你,这说明连接效果太好了。
2楼2008-12-07 20:34:57
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)

这说明转化效率很高
3楼2008-12-07 20:41:36
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figo.339

木虫 (著名写手)

转化效率高的原因,下次你吸取菌液涂布平板时少取些(与上次相比),应该会好些。
4楼2008-12-07 21:19:01
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