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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » T4连接后出现的问题，很奇怪
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可以吗

银虫 (小有名气)

[交流] T4连接后出现的问题，很奇怪

我将目的基因和表达载体双酶切回收后，用T4连接酶，16度连接过夜，连接体系是20微升的。
再转进JM109感受态，37度培养将近12小时。
结果发现培养皿上（含抗生素）长了一层密密麻麻的菌落，几乎连成一片，其中还有分散的、长得比较大的单克隆。
我觉得是我想要的菌落，就试着尽量挑了些，结果pcr有我的目的条带，也能双酶切到我的条带。
可我就是不明白为什么人会长出那么一层像雾一样的菌？这是怎么回事？请教明白的虫有友。谢谢了

[ Last edited by 可以吗 on 2008-12-7 at 20:23 ]
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1楼 2008-12-07 20:19:55
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
恭喜你，这说明连接效果太好了。
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2楼2008-12-07 20:34:57
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)
这说明转化效率很高
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3楼2008-12-07 20:41:36
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figo.339

木虫 (著名写手)
转化效率高的原因，下次你吸取菌液涂布平板时少取些（与上次相比），应该会好些。
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4楼2008-12-07 21:19:01
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可以吗

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by figo.339 at 2008-12-7 21:19:
转化效率高的原因，下次你吸取菌液涂布平板时少取些（与上次相比），应该会好些。

那为什么有少部分长得大，而绝大多数是小针点那么大？
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5楼2008-12-07 21:54:45
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forget1997

银虫 (小有名气)
问楼主一个问题：
连接反应之后，转化JM109之前，质粒要纯化吗？如果要，用什么纯化？
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6楼2008-12-08 13:30:57
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ningluztt

铜虫 (小有名气)
★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):这是一种解释，谢谢。很多时候，我们要探寻为什么
个人觉得小菌落是卫星菌落，转化后37度培养时间过长就会导致在你的目的菌落附近长出很多小菌落，就是卫星菌落。卫星菌落就是在培养时间较长的情况下，由于 目的菌落中的转化进去的质粒产生的酶将菌落周围的抗生素降解了，使得在目的菌落周围的本来被抑制的大肠杆菌长出来了导致的。
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7楼2008-12-08 17:32:45
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synhily

木虫 (正式写手)
请问楼主是平连还是粘连，连接条件是什么？详细说明一下，大家共同学习噻！
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8楼2008-12-08 18:31:00
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lybio

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by forget1997 at 2008-12-8 13:30:
问楼主一个问题：
连接反应之后，转化JM109之前，质粒要纯化吗？如果要，用什么纯化？

连接后可直接转化，不用纯化
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9楼2008-12-11 14:41:30
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lybio

金虫 (正式写手)
楼主也才培养12h，这时间还不至于出现卫星菌落吧
是不是氨苄失效呢？
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10楼2008-12-11 14:42:41
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