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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)

[求助] 空白对照出现引物二聚体条带,但是一起电泳的样品却没有出现二聚体条带 已有3人参与

空白要是有引物二聚体条带的话样品在同一位置也该有条带啊,问题到底出在哪?

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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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guishuai_tj: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-12-28 11:44:04
样品PCR把引物消耗了当然没有引物二聚体,空白对照根本没有消耗引物。

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4楼2016-12-08 11:31:15
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

样品把引物用完了呗,这不算问题,你要非想样品也出现引物条带的话多加点引物

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6楼2016-12-08 14:37:39
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
5楼: Originally posted by guishuai_tj at 2016-12-08 12:36:44
那有什么方法可以消除引物二聚体呢?我的空白对照引物二聚体很亮,样品中没有出现该条带,只有目标条带。
...

你的引物用量多了吧,貌似你的PCR片段小,循环数多,消耗太多引物。一般截图的时候去掉就行。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2016-12-13 10:23:24
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普通回帖

guishuai_tj

铁虫 (著名写手)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-06 01:59:58
忘了说了,我做的是dna的琼脂糖凝胶电泳

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2楼2016-12-05 22:10:05
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yakun123

铁虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-06 02:00:04
我也有点好奇你的结果,也想不明白,是不是加模板后,引物与模板结合会降低引物二聚体呢,关注一下

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3楼2016-12-06 00:55:18
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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)

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引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2016-12-08 11:31:15
样品PCR把引物消耗了当然没有引物二聚体,空白对照根本没有消耗引物。

那有什么方法可以消除引物二聚体呢?我的空白对照引物二聚体很亮,样品中没有出现该条带,只有目标条带。

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5楼2016-12-08 12:36:44
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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)

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引用回帖:
6楼: Originally posted by Ailee桑卡娜 at 2016-12-08 14:37:39
样品把引物用完了呗,这不算问题,你要非想样品也出现引物条带的话多加点引物

那想消除引物二聚体呢,有什么方法吗?

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7楼2016-12-08 19:05:48
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Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by guishuai_tj at 2016-12-08 19:05:48
那想消除引物二聚体呢,有什么方法吗?
...

空白对照应该会有引物二聚体条带的,如果没有才是出了问题的吧…

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8楼2016-12-08 20:56:45
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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2016-12-13 10:23:24
你的引物用量多了吧,貌似你的PCR片段小,循环数多,消耗太多引物。一般截图的时候去掉就行。...

是的,扩增片段小于100bp,35个循环,主要是引物二聚体条带太亮了,基本和目的条带一样亮。我打算尝试减少引物用量试试

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10楼2016-12-13 10:52:42
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