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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR总是P不出来,什么原因
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夜奴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
33楼: Originally posted by 沉默的独角兽 at 2016-12-05 10:01:06
纯化一下你的DNA，然后再试试

准备换模板了，重新提RNA

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51楼2016-12-05 23:41:41
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夜奴

新虫 (初入文坛)
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41楼: Originally posted by Bioexperixgs at 2016-12-05 15:35:22
模板稀释1000倍重新跑

要稀释那么多吗？

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52楼2016-12-05 23:41:57
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夜奴

新虫 (初入文坛)
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27楼: Originally posted by 雪雨风霜露 at 2016-12-05 08:46:17
我们实验室也有时能p出来有时p不出来，换个酶就好了，加样孔很亮应该是蛋白比较多吧

用了两种酶，pfu和LA Taq，都是偶尔能p出20ul的体系，可是再用pcr产物做模板就是第一张图那个现象

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53楼2016-12-05 23:44:04
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夜奴

新虫 (初入文坛)
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16楼: Originally posted by 夜一 at 2016-12-04 23:44:43
可能引物的浓度过高，退火温度适当增加两度试试。

今天做了退火温度的梯度，增了两度，还是没p出来，准备重新提RNA了

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54楼2016-12-05 23:45:35
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夜奴

新虫 (初入文坛)
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20楼: Originally posted by 谢光耀 at 2016-12-05 07:06:50
模版是cDNA？

模板是cDNA

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55楼2016-12-05 23:47:47
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LLT1229

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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25楼: Originally posted by 夜奴 at 2016-12-05 08:18:38
嗯，其实这就是在重复，之前一次就能p出来了，可是送测序错误50%，现在再重p就p不出来了，换过模板
...

我觉得引物有问题。。。

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56楼2016-12-05 23:48:34
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夜奴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
56楼: Originally posted by LLT1229 at 2016-12-05 23:48:34
我觉得引物有问题。。。
...

也可能吧，正好引物也用完了，换新的再试试，估计接下来的溶液什么的都要换新，希望能p出来

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57楼2016-12-05 23:51:10
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小鹏鹏做实验

新虫 (初入文坛)
因为你没有C

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58楼2016-12-06 00:25:54
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xmcbanxia

铁杆木虫 (著名写手)
用KOD酶试试看

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59楼2016-12-06 00:29:07
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
52楼: Originally posted by 夜奴 at 2016-12-05 23:41:57
要稀释那么多吗？
...

看你跑胶图上上样应该是5或10吧，这个时候相当于模板稀释了25倍，这么亮。一般50ul体系模板50ng绝对够了

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60楼2016-12-06 08:58:55
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