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夜奴

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR总是P不出来,什么原因 已有26人参与

最近在PCR,总是P不出来,用的模板,第一次p50ul的体系,p出来了,跑胶有杂带,后面再p就p不出来了,有时候什么都没有,有时候拖带严重,有时候p20ul的,p出目的条带了,用来做模板再p50ul的,就p不出来了,而且跑胶像图片这样,请问这是什么原因?谢谢

PCR总是P不出来,什么原因


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xucb970

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:27:15
xn8008: 应助指数+1 2016-12-05 02:32:15
加样孔下面的那条带是什么,好亮,可以找找它的原因。

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宁坐板凳十年冷,不写文章半句空。
4楼2016-12-04 22:35:30
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夜一

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能引物的浓度过高,退火温度适当增加两度试试。

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16楼2016-12-04 23:44:43
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普通回帖

夜奴

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:32:01
图中浅浅的条带是目的条带

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2楼2016-12-04 22:30:56
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xucb970

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:32:08
xn8008: 应助指数+1 2016-12-05 02:32:21
是不是模板加多了,稀释后再试试。

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宁坐板凳十年冷,不写文章半句空。
3楼2016-12-04 22:33:26
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夜奴

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:32:32
50ul的体系是LA Taq    0.5ul         10x buffer  5ul     dNTPs    4ul      引物 FP ,RP各1ul,ddH2O      37.5ul,退火温度56℃    30s

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5楼2016-12-04 22:36:57
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夜奴

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:32:43
引用回帖:
3楼: Originally posted by xucb970 at 2016-12-04 22:33:26
是不是模板加多了,稀释后再试试。

稀释过也是这样,p了好几次,都是这样的条带,用过pfu酶,也用过la taq

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6楼2016-12-04 22:38:02
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夜奴

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:34:02
引用回帖:
4楼: Originally posted by xucb970 at 2016-12-04 22:35:30
加样孔下面的那条带是什么,好亮,可以找找它的原因。

不知道那个是什么,用这个模板,20ul的体系p出来过,50ul的也p出来过,最近几次都是这样的条带

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7楼2016-12-04 22:39:22
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夜奴

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:34:09
8楼2016-12-04 22:50:06
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夜奴

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:34:16
引用回帖:
8楼: Originally posted by 夜奴 at 2016-12-04 22:50:06

旁边拖带的是稀释模板后p的

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9楼2016-12-04 22:50:51
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521xiaomei

新虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:34:43
好像有蛋白残留

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10楼2016-12-04 23:03:26
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