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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR总是P不出来,什么原因
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夜奴

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR总是P不出来,什么原因 已有26人参与

最近在PCR，总是P不出来，用的模板，第一次p50ul的体系，p出来了，跑胶有杂带，后面再p就p不出来了，有时候什么都没有，有时候拖带严重，有时候p20ul的，p出目的条带了，用来做模板再p50ul的，就p不出来了，而且跑胶像图片这样，请问这是什么原因？谢谢

PCR总是P不出来,什么原因


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1楼 2016-12-04 22:30:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xucb970

金虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:27:15
xn8008: 应助指数+1 2016-12-05 02:32:15
加样孔下面的那条带是什么，好亮，可以找找它的原因。

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宁坐板凳十年冷，不写文章半句空。
4楼2016-12-04 22:35:30
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夜一

新虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能引物的浓度过高，退火温度适当增加两度试试。

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16楼2016-12-04 23:44:43
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夜奴

新虫 (初入文坛)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:32:01
图中浅浅的条带是目的条带

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2楼2016-12-04 22:30:56
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xucb970

金虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:32:08
xn8008: 应助指数+1 2016-12-05 02:32:21
是不是模板加多了，稀释后再试试。

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宁坐板凳十年冷，不写文章半句空。
3楼2016-12-04 22:33:26
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夜奴

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:32:32
50ul的体系是LA Taq    0.5ul         10x buffer  5ul     dNTPs    4ul      引物 FP ,RP各1ul，ddH2O      37.5ul,退火温度56℃    30s

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5楼2016-12-04 22:36:57
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夜奴

新虫 (初入文坛)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:32:43
引用回帖:
3楼: Originally posted by xucb970 at 2016-12-04 22:33:26
是不是模板加多了，稀释后再试试。

稀释过也是这样，p了好几次，都是这样的条带，用过pfu酶，也用过la taq

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6楼2016-12-04 22:38:02
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夜奴

新虫 (初入文坛)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:34:02
引用回帖:
4楼: Originally posted by xucb970 at 2016-12-04 22:35:30
加样孔下面的那条带是什么，好亮，可以找找它的原因。

不知道那个是什么，用这个模板，20ul的体系p出来过，50ul的也p出来过，最近几次都是这样的条带

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7楼2016-12-04 22:39:22
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夜奴

新虫 (初入文坛)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:34:09
PCR总是P不出来,什么原因-1

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8楼2016-12-04 22:50:06
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夜奴

新虫 (初入文坛)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:34:16
引用回帖:
8楼: Originally posted by 夜奴 at 2016-12-04 22:50:06

旁边拖带的是稀释模板后p的

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9楼2016-12-04 22:50:51
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521xiaomei

新虫 (小有名气)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-05 02:34:43
好像有蛋白残留

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10楼2016-12-04 23:03:26
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