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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR总是P不出来,什么原因
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alicelchf

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你能说一下你的浓度吗?你只说体积无法给你意见的

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修身、齐家、治国、平天下
31楼2016-12-05 09:48:40
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ttjj3721

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物估计不行吧，二聚体很明显

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32楼2016-12-05 09:52:48
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沉默的独角兽

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
纯化一下你的DNA，然后再试试

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33楼2016-12-05 10:01:06
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zhao_shujing

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个原因有很多，我刚开始做PCR事也这样，我给你列出几个原因看看。1、你要扩的基因对应的退火温度不是最适的；2、酶失活；3、DNA提取就没有做好或者DNA降解；4、对应的buffer用的时间太久，或者反复冻融次数过多。再者，我个人觉得20微升体系就可以，不用50微升。至于点样孔亮，极有可能是杂质。
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34楼2016-12-05 10:50:26
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森林之吻

新虫 (小有名气)
来我们公司试试

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35楼2016-12-05 11:01:24
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智明寻找春娇

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1，首先可能是电泳缓冲液用久了，里面有不少的杂质DNA之类的。
2，可能是胶配的太硬了，就是琼脂糖加多了，导致物质无法在短时间内跑出来。
3，可能是样品不纯，含有蛋白质等大分子物质，堵住了胶孔，使样品跑不出来。
4，体系里面的dNTPS.感觉有点多

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36楼2016-12-05 11:06:37
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夜奴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
36楼: Originally posted by 智明寻找春娇 at 2016-12-05 11:06:37
1，首先可能是电泳缓冲液用久了，里面有不少的杂质DNA之类的。
2，可能是胶配的太硬了，就是琼脂糖加多了，导致物质无法在短时间内跑出来。
3，可能是样品不纯，含有蛋白质等大分子物质，堵住了胶孔，使样品跑不出 ...

可是以前都p出来过，一样的体系，一样的模板，酶等是新的

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37楼2016-12-05 12:02:54
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夜奴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
26楼: Originally posted by wsywxs at 2016-12-05 08:27:51
我纳闷了，你给的后两幅图里目标条带为什么大小不一致？目标条带到底该多大？

2100目的条带

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38楼2016-12-05 12:05:57
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夜奴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
34楼: Originally posted by zhao_shujing at 2016-12-05 10:50:26
这个原因有很多，我刚开始做PCR事也这样，我给你列出几个原因看看。1、你要扩的基因对应的退火温度不是最适的；2、酶失活；3、DNA提取就没有做好或者DNA降解；4、对应的buffer用的时间太久，或者反复冻融次数过多。 ...

嗯嗯，谢谢

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39楼2016-12-05 12:08:12
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夜奴

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
34楼: Originally posted by zhao_shujing at 2016-12-05 10:50:26
这个原因有很多，我刚开始做PCR事也这样，我给你列出几个原因看看。1、你要扩的基因对应的退火温度不是最适的；2、酶失活；3、DNA提取就没有做好或者DNA降解；4、对应的buffer用的时间太久，或者反复冻融次数过多。 ...

之前一样的体系，能p出来，然后酶，buffer,dNTPs都是新的

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40楼2016-12-05 12:10:29
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