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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重叠pcr
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yakun123

铁虫 (小有名气)

[求助] 重叠pcr 已有2人参与

我做的重叠pcr总是有很多杂带，目的片段2000左右非常弱，切胶回收都做不了，这是怎么回事？

重叠pcr


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1楼 2016-12-03 18:36:23
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yakun123

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-04 18:36:01
设置梯度退火温度找到最适合的退火温度，另外你的是两个质粒模板拼接的吗？可以试着把片段转到载体，以质粒为模板做重叠PCR。

没有明白你说的质粒模板拼接，能详细说一下吗 ，我的是在一个基因中插入一个基因，所以一共是三段，包括上游同源臂，目的基因，下游同源臂

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3楼2016-12-06 00:52:57
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-04 22:29:33
设置梯度退火温度找到最适合的退火温度，另外你的是两个质粒模板拼接的吗？可以试着把片段转到载体，以质粒为模板做重叠PCR。
赞一下(1人) 回复此楼
知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
2楼2016-12-04 18:36:01
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仇峰12306

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做重叠的时候试试不同的温度，还有就是你最后P全长的时候可以再重新设计一对引物来做PCR。另外你设计引物的时候错配率是不是挺高的啊？
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4楼2016-12-06 08:58:52
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